检索历史 清除

摘要目的:通过建立离体心肌细胞缺氧/复氧再灌注模型探讨缺血预处理(Ischemic preconditioning，IPC)对心肌细胞缝隙连接蛋白43(Connexin 43，Cx43)表达及功能的影响，进一步阐明IPC抗缺血再灌注(Ischemia-reperfusion，I/R)损伤的分子机制，为IPC的临床应用和抗I/R损伤的新药开发奠定基础。<br>　　方法:采用细胞培养技术，取出生2天的SD新生大鼠心室肌细胞进行离体培养，将培养96小时的心肌细胞分成3组:空白对照组、缺氧/复氧再灌注组及缺氧预处理组，然后观察各组心肌细胞的生长情况，使用划痕标记染料示踪技术检测Cx43通道的细胞通讯功能，使用Westernblotting半定量心肌细胞总的Cx43和磷酸化Cx43水平。<br>　　结果:1.细胞生长情况观察发现，培养96h的心肌细胞搏动频率约为74±5次/min，缺氧/复氧再灌注处理后搏动明显减弱，频率为50±6次/min(P＜0.01)。缺氧/复氧再灌注前给予缺氧10min/复氧10min3个循环的缺氧预处理(Hypoxic preconditioning，HPC)，缺氧/复氧再灌注后搏动频率无明显改变(P＞0.05)。心肌细胞坏死计数提示，缺氧预处理组与缺氧/复氧再灌注组相比较减少了心肌细胞坏死个数，高于空白对照组，各组间变化有统计学意义(P＜0.01)。2.划痕标记染料示踪技术检测Cx43通道的细胞通讯功能结果显示，空白对照组荧光传至划痕邻近第4列细胞以外，缺氧/复氧再灌注处理后心肌细胞缝隙连接通讯明显下降，荧光仅传至划痕邻近第一或第二列细胞，预处理组细胞荧光传递无明显减弱，可传至第四列细胞。3.Westernblotting分析结果显示，总的Cx43和磷酸化Cx43蛋白在缺氧预处理组中的表达水平明显高于缺氧/复氧再灌注组(P＜0.01)，与空白对照组相比较无显著差异(P＞0.05)。<br>　　结论:HPC保持了心室细胞最主要的缝隙连接蛋白Cx43和磷酸化Cx43的表达量，减少缺氧/复氧再灌注引起的Cx43脱磷酸化，从而保持Cx43构成的缝隙连接的基本结构和功能，减少心肌细胞死亡，实现心肌抗I/R损伤。