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卵巢癌不同证型P-gp、P53的表达及亚砷酸、托泊替康等干预的体外研究

摘要目的: 通过研究卵巢癌中医临床辨证特点、P-gp和p53表达情况以及亚砷酸、托泊替康等抑制人卵巢癌细胞增殖的体外研究,探讨P-gp和p53表达与中医证型、卵巢癌化疗敏感性的关系,探讨亚砷酸、托泊替康等在多药耐药卵巢癌化疗中的应用前景以及多药耐药卵巢癌的中西医结合治疗方案。 方法: 1、中医标准化辨证分型:选择113例(2003年01月~2005年04月)南京大学医学院附属南京市鼓楼医院和江苏省肿瘤医院卵巢癌病例,采用中医标准化辨证方法,观察和分析其证型特点,并探讨卵巢癌发病病机。 2、免疫组化法:选择42例卵巢癌临床患者和人卵巢癌细胞系NIH-OVCAR-3、SK-OV-3、H08910,检测P-gp与p53的表达情况。 23、MTT法:体外观察亚砷酸、托泊替康等对24例临床卵巢癌组织和人卵巢癌细胞耐药细胞系(NIH-OVCAR-3)及非耐药细胞系(SK-OV-3、HO8910)增殖的抑制效应,并进行对比性研究。 结果: 1、在113例被观察卵巢癌患者中,39.8%的患者表现出轻重不一的气虚证,69.9%的患者表现出轻重不一的阴虚证,53.1%的患者表现出轻重不一的血瘀证,10.62%的患者表现气阴两虚证,21.24%的患者表现阴虚夹瘀证,23.89%的患者表现气虚夹瘀证。 2、在42例卵巢癌临床患者中,P-gp的阳性表达率为60%,p53的阳性表达率为51.2%,两种基因表达均为阳性的占30.95%。在P-gp表达阳性的患者中,气虚证、阴虚证、血瘀证、气阴两虚证、阴虚夹瘀证和气虚夹瘀证所占比例分别为41.67%、83.33%、54.17%、12.5%、16.67%和25%,在p53表达阳性的患者中,气虚证、阴虚证、血瘀证、气阴两虚证、阴虚夹瘀证和气虚夹瘀证所占比例分别为19.05%、76.19%、61.90%、4.76%、28.57%和14.29%。两种基因在NIH-OVCAR-3细胞中的表达均为阳性,在SK-OV-3、HO8910 细胞中的表达均为阴性。 3、结合免疫组化和临床肿瘤药敏试验结果,统计学分析表明,耐药卵巢癌对顺铂的敏感度、P-gp和p53的表达以及卵巢癌的转移和复发与非耐药卵巢癌有明显差异(p<0.05),耐药患者的P-gp表达较敏感组高(p<0.05)。p53的表达、卵巢癌病理类型与患者的中医证型构成比在两者无明显差异(p>0.05)。 4、据P-gp、p53表达情况和临床肿瘤药敏结果,24例临床卵巢癌患者可分为非耐药组(11例)和耐药组(13例),非耐药组肿瘤细胞以顺铂联合紫杉醇或环磷酰胺的抑制率最高(p<0.05),耐药组肿瘤细胞的抑制率则以亚砷酸和托泊替康联用最高(p<0.05)。亚砷酸、托泊替康单用或合用对人卵巢癌细胞系NIH-OVCAR-3、SK-OV-3和HO8910均有抑制作用,其抑制率随时间延长和浓度升高而升高。对NIH-OVCAR-3细胞,两种药物具有协同作用。亚砷酸、托泊替康等作用后,NIH-OVCAR-3细胞可出现典型的凋亡和坏死形态学改变。 结论: 1、近年苏皖地区卵巢癌患者中,P-gp和p53基因的表达率较高,其中医证型以气虚证和阴虚证多见,或间夹血瘀证。P-gp的表达与卵巢癌对顺铂的敏感性和耐药性相关,也可能与复发和转移相关。 2、亚砷酸、托泊替康等无论单用或合用对卵巢癌细胞均有抑制作用,两药合用可增强抑制效应。对于耐药卵巢癌和人卵巢癌多药耐药细胞系NIH-OVCAR-3而言,亚砷酸和托泊替康联合化疗方案体外杀伤效应优于其他所选组合。 3、亚砷酸与托泊替康组成的联合化疗方案,结合中医气阴双补、化瘀散结法治疗卵巢癌,中西医结合在多药耐药卵巢癌的治疗上有一定的临床意义。

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