摘要目的:了解脐血间充质干细胞(LJCB-MSCs)对植物血凝素(PHA)诱导淋巴细胞(LCs)增殖的影响并与骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)作比较;探讨UCB-MSCs对PHA诱导的LCs增殖抑制实验中的最佳细胞量效比;测定LJCB-MSCs各亚组转化生长因子(rGF-β1)水平及肝素对UCB-MSCs分泌TGF-β1的影响。 方法:对培养的UCB-MSCs和BM-MSCs进行形态、表型及功能方面的综合鉴定;将不同细胞浓度的UCB-MSCs和BM-MSCs加入由PHA诱导的LCs转化实验体系中,MTT法测定各亚组对LCs的抑制率。用ELISA法测定上清液中的TGF-β1水平。 结果: (1)用密度梯度离心的方法从UCB和人BM中分离单个核细胞(MNC),用贴壁法培养MSC,通过形态、表型及功能进行综合鉴定。培养至第3代的MSC具有长梭形的典型形态改变,表面分子检测显示高表达CDl66、CD29、CD54,低表达CDl3、CD34、CD45。经体外诱导可成为脂肪细胞。(2)MSCs:L,Cs为1:1、0.5:1、0.1:1、0.05:1、0.02:1、0.01:1时,LJCB-MSCs组对PHA刺激的L,Cs增殖均有抑制作用,抑制率分别为49.5±4.8、58.4±6.0、38.1±4.0、31.4±3.2、24.3±3.2、12.6±6.7;而BM-MSCs组抑制率随BM-MSCs数量不同而异,分别为52.4±8.4、65.1±9.7、34.7±4.5、13.0±6.4、-10.7±12.6、-43.9±9.4。UCB-MSCs组及BM-MSCs组在MSCs:LCs为0.05:1、0.02:1、0.01:l的三个亚组间对LCs的抑制率存在显著差异(P<0.05)。IJCB-MSCs组抑制率强于BM-MSCs组。(3)当IJCB-MSCs:L,Cs为0.75:1时抑制作用最强,与其他亚组比较有显著差异(P<0.05)。(4)UCB-MSCs各亚组上清液中TGF-β1水平高于BM-MSCs组,呈细胞剂量依赖性;UCB-MSCs组抑制率与TGF-β1水平相关性略小(r=0.85),而BM-MSCs组抑制率与TGF-β1水平显著相关(r=O.95)。(5)肝素为50、100、150、200U/ml时,可使UCB-MSCs分泌TGF-β1增高,分别为308.1 pg/ml、753.2 pg/ml、1148.9 pg/ml、643.3 pg/ml,肝素浓度为50u/ml能使UCB-MSCs对PHA诱导的LCs增殖的抑制作用明显增强。 结论: UCB与BM一样在体外均可培养出MSC。UCB-MSCs对PHA诱导的LCs增殖有抑制作用,而BM-MSCs对LCs的作用则不衡定,在MSCs数量多时呈抑制作用,细胞减少时,作用开始不稳定,继续减少到一定数量时,有促LCs增殖作用。UCB-MSCs:LCs为0.75:1时,对LCs增殖抑制作用最强。UCB-MSCs与BM-MSCs均分泌TGF-β1,以UCB-MSCs组水平更高,BM-MSCs组免疫抑制作用与TGF-β1水平呈高度相关性,而UCB-MSCs组免疫抑制作用与TGF-β1水平相关性稍小,可能还有其他因素参与。肝素对UCB-MSCs分泌TGF-β1的能力有增强作用,对免疫抑制作用略有增强。UCB-MSCs作为另一种来源的MSC可减少移植后的排斥反应、降低移植物抗宿主病(GVHD)的发生以及降低HLA不完全相合移植风险,将具有更加广阔的应用前景。
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