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摘要本文从基因扩增的角度出发，在实验室前期进行的食管癌细胞遗传学和分子遗传学研究以及文献报道的基础上，从扩增发生频率较高的染色体区段1 q、3q、8q和11q中寻找与食管癌发生发展有关的扩增基因。 首先挑选30个可能与肿瘤相关的基因，通过RT-PCR方法检测其在16对食管癌及相应的癌旁组织的表达，结果显示TXNRD3、RAB7、AMOTL2、CCNL1、EIF5A2、p63、MUC4、TMEMl6A和CTTN基因在食管癌组织过表达的频率大于30％。利用这9个基因内部的UniSTS，进一步通过半定量PCR方法检测其在另外20对食管癌及配对癌旁组织中的基因组DNA含量，发现TXNRD3、RAB7、AMOTL2、CCNL1、MUC4、TMEMl6A和CTTN基因在食管癌组织中扩增频率不低于20％。荧光原位杂交也证实CCNLl和CTTN基因在食管癌组织存在扩增。 定位于11q13上的cortactin(CTTN,也称为EMS1)基因编码的蛋白是促进肌动蛋白核化和支链形成的重要分子，目前对其在具体肿瘤中作用的研究还相对较少，为此我们对该基因在食管癌中的作用进行了深入的研究。食管癌组织芯片的免疫组化分析发现CTTN在食管癌中过表达率为68.8％(86/125)，过表达与淋巴结转移和肿瘤分期相关。11lq13上另一重要癌基因CCND1在食管癌中过表达率为47.0％(55/117)，其表达虽与CTTN表达显著相关，但与淋巴结转移等临床参数无明显相关性。说明CTTN基因是11q13上与食管癌淋巴结转移和肿瘤分期相关的独立因素。 在食管癌细胞系EC9706的体外实验中，CTTN RNAi不影响细胞的增殖、平板集落形成、细胞周期进展和对Matrigel的粘附能力，但可抑制细胞的划痕愈合、运动穿膜、Matrigel侵袭、软琼脂集落形成和抗失巢凋亡能力。体内实验显示，CTTN表达降低可抑制裸鼠皮下瘤生长和实验性肺转移，延长实验性转移裸鼠的生存期。针对CTTN影响EC9706细胞抗失巢凋亡能力这一现象，我们进一步探讨其分子机制。发现P13K和MEK抑制剂均可增加EC9706细胞的失巢凋亡，但CTTN只影响Akt的活化，对Erk和EGFR激活无影响，提示CTTN的抗失巢凋亡作用与PI3K-Akt通路有关。我们在KYSE410食管癌细胞中也验证了CTTN的高表达有助于保护细胞抵抗失巢凋亡，并可提高Akt的活化水平。进一步在EC9706和KYSE410细胞中，Co-IP实验证实CTTN和PI3K蛋白分子可被共沉淀，提示CTTN可能通过与PI3K相互作用，活化PI3K-Akt通路而提高食管癌细胞的抗失巢凋亡的能力。 以上结果表明，从DNA扩增片段中寻找在肿瘤过表达的基因是鉴定与特定肿瘤相关癌基因的有效方法。染色体11q 13上的CTTN基因，通过发生扩增和过表达，提高食管癌细胞的运动和抗失巢凋亡能力，是促进食管癌侵袭转移的重要癌基因。