促卵泡素单克隆抗体的制备与鉴定-论文-万方医学网

促卵泡素单克隆抗体的制备与鉴定

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摘要FSH是由垂体前叶促性腺激素细胞的内质网上生成的一种糖蛋白激素，它与人类及其它哺乳动物的生殖功能密切相关，获得FSH单抗对于深入研究FSH的生理功能有重要的意义。利用碳化二亚胺法制备FSH-BSA共价复合物，作为免疫原，免疫Balb/c小鼠。间接ELISA法检测抗体效价。以PEG 4000为融合剂，选用对数生长期的SP2/0骨髓瘤细胞与免疫脾细胞融合，有限稀释法筛选阳性克隆，制备单克隆抗体并进行鉴定。试验结果如下： 1 FSH-BSA免疫小鼠后，抗体效价均超过1：2.5×10<'4>，且免疫小鼠无发情表现，证明FSH-BSA有强的免疫原性。 2 间接ELISA测定的条件为：辣根过氧化物酶标记羊抗鼠IgG(酶标二抗)最适稀释倍数为1：1 200；FSH包被抗原的浓度为10 μg/mL，包被液为pH 9.6，0.05 mol/L的碳酸盐缓冲液：封闭液为1.0％的脱脂奶粉；底物液为0.1％的TMB；终止液为2 mol/L的硫酸。 3 在融合后第7天出现小的克隆，第12天杂交瘤细胞铺满孔底80％，用建立的间接ELISA法筛选阳性孔，克隆率为36.45％，阳性克隆率为17.71％。 4 筛选得到两株阳性的杂交瘤细胞，分别命名为G3F8、B4A5，间接ELISA检测腹水效价分别为1：5×10<'4>和1：10<'4>，且具有特异性。 5 杂交瘤细胞株经冻存和传代培养证明具有稳定分泌抗体的能力。