家兔子宫内膜及平滑肌细胞体外分离及扩增的研究-论文-万方医学网

家兔子宫内膜及平滑肌细胞体外分离及扩增的研究

二维码有效期 120s

收藏纠错

摘要对子宫内膜腺上皮细胞、基质细胞及平滑肌细胞进行体外分离培养，可以为妊娠及子宫疾病等生理与病理方面的研究提供理想的模型。获得大量的、纯化的子宫细胞是上述研究的关键步骤之一，也是国内外学者关注的问题之一。为探讨一种能够获得大量的纯度高、活力强的子宫细胞的方法，本试验采用酶消化法、过滤法、离心法及差速贴壁纯化法相结合，获取家兔子宫内膜腺上皮细胞、基质细胞及子宫平滑肌细胞；转式生物反应器和微载体对子宫内膜细胞进行大量扩增；于培养液中添加不同浓度的雌激素和孕激素及其组合对细胞进行培养；通过光镜观察、免疫细胞化学染色、免疫荧光染色对细胞进行鉴定，通过流式细胞仪检测细胞纯度；用噻唑蓝(MTT)法间接测定雌激素和孕激素对子宫内膜细胞和平滑肌细胞体外增殖的影响。获得以下结果： 1．利用酶消化法、过滤法、离心法及差速贴壁法相结合，获得了高纯度的子宫内膜上皮细胞、基质细胞以及平滑肌细胞。免疫细胞化学染色和流式细胞仪分析表明，三种细胞的纯度分别达到96％，95％和98％以上。 2．用旋转式生物反应器和微载体扩增细胞效率高，细胞增殖快，增殖速度大约为普通培养法的4倍，细胞特性跟普通培养法没有差别。 3．雌激素(100nmol/L)和少量孕激素(10nmol/L)对上皮细胞增殖有明显的促进作用；孕激素(100nmol/L)对基质细胞的增殖有明显的促进作用；两种激素对平滑肌细胞的增殖也有一定促进的作用。完善了子宫内膜上皮细胞、基质细胞和平滑肌细胞的分离纯化方法，用旋转式生物反应器和微载体实现了对细胞的大量扩增，证明了雌激素和孕激素对体外培养的上述细胞有促进增殖的作用，为研究子宫疾病及胚胎植入奠定了基础。