山羊乳腺上皮细胞对外周血多形核嗜中性粒细胞功能的影响-论文-万方医学网

山羊乳腺上皮细胞对外周血多形核嗜中性粒细胞功能的影响

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摘要本研究采用胶原酶和胰蛋白酶相结合的消化法进行了山羊乳腺上皮细胞的体外培养，并用MTT法测定其对外周血多形核嗜中性粒细胞(PMN)活性的影响，为进一步揭示乳腺局部免疫机制提供试验依据。试验取得以下结果： 1.首先用2 g/L的胶原酶消化4.5 h，再用0.5 g/L的胰蛋白酶消化30 min消化山羊乳腺组织，与单独使用胶原酶消化相比获得了更多的单细胞。所培养的原代细胞经0.5g/L胰蛋白酶/0.2 g/L EDTA纯化3～4次，得到较为纯净的山羊乳腺上皮细胞，经免疫组织化学鉴定，阳性率大于90％。 2.组织块培养时，乳腺组织在涂有鼠尾胶原和不铺鼠尾胶原的培养皿上均能长出乳腺上皮细胞，表明山羊乳腺上皮细胞的生长不依赖鼠尾胶原。 3.分别采用淋巴细胞分离液与Percoll分离液相结合的梯度离心法、Dextran作用下的红细胞自然沉降法和裂解红细胞法进行PMN的分离。结果显示，Percoll梯度离心法所得到的PMN数量多，形态改变小，明显优于另外两种方法。 4.用MTT法测定山羊乳腺上皮细胞及其条件培养液对外周血PMN活性的影响，结果显示，山羊乳腺上皮细胞及其条件培养液对外周血PMN的活性有明显的抑制作用。这提示乳腺上皮细胞通过直接或间接途径抑制PMN功能的发挥。