检索历史 清除

摘要目的： 近年来，随着各种创伤、性病患者的剧增及腔镜的广泛开展，尿道狭窄患者大幅度上升，术后尿道再次狭窄的患者亦明显增加。临床上对复发性尿道狭窄的处理集中在改变大体解剖结构层面，技术和方法不断更新，但疗效往往不令人满意，且容易再次出现尿道狭窄，究其原因为对复发性尿道狭窄的机制认识不清，缺乏有效的措施阻止尿道狭窄复发。目前研究发现复发性尿道患者狭窄段组织存在典型的瘢痕过度增生改变。 创伤修复依赖于细胞和细胞外基质问的相互作用。成纤维细胞是最主要的修复细胞，在某些细胞趋化因子的作用下由创周向创面移位，合成、分泌大量的细胞外基质(ECM)。成纤维细胞的过度增生以及．EMC的合成增多、分解减少，均会导致ECM沉积于创面，最终形成增生性瘢痕。现已证实皮肤、角膜、神经等部位增生性瘢痕的发生与TGF-β密切相关，TGF-β是成纤维细胞的强效趋化因子。TGF-β为超基因家族，在哺乳动物中只存在3种形式的TGF-β，即TGF-β1～TGF-β3，它们在不同组织的分布及表达活性存在明显差异，在瘢痕的形成中的作用亦不同。尿道处于特殊部位，创面长期受尿液的炎性刺激，其瘢痕亦有其特殊性，为此，我们研究复发性尿道狭窄段组织病理学特点及与TGF-β不同亚型的的关系，为下一步探讨防止尿道狭窄术后复发提供理论依据。 方法： 收集复发性尿道狭窄段组织及正常尿道组织标本，对两组标本分别进行HE染色、胶原纤维染色、弹力纤维染色，并针对三种不同亚型TGF-β对复发性尿道狭窄组织进行免疫组化染色，观察两组尿道标本组织结构及其胶原纤维和弹力纤维含量变化，比较TGF-β不同亚型在复发性尿道组织中的表达、分布情况；应用MetaMorph显微图象分析，并对各组切片进行半定量分析。 体外利用胰酶消化法培养复发性狭窄尿道瘢痕成纤维细胞，观察TGF-β1对其生物活性及其功能的影响。设计并合成正义、反义及随义TGF-β1寡核苷酸，实验设立空白对照组、脂质体组、正义核酸组、随义核酸组和反义核酸组，除空白组外，其余均在脂质体介导下瞬时转染成纤维细胞，观察转染后反义TGF-β1寡核苷酸对成纤维细胞增殖活性、TGF-β1基因表达及Ⅰ型胶原分泌的影响。 主要结果和结论如下： 1．与正常尿道组织相比，复发性尿道狭窄段组织病理学特点为：管腔变窄、不规则，尿道粘膜上皮变薄，甚至消失，粘膜下可见大量成纤维细胞。 2．胶原纤维、弹力纤维染色显示正常尿道海绵体组织被大量的纤维结缔组织代替，胶原纤维大量存在，结构紊乱，弹性纤维明显减少。结论：复发性尿道狭窄段局部创面瘢痕过度增生，胶原纤维与弹性纤维比例失调导致局部组织僵硬、弹性差，最终出现排尿障碍。 3．TGF-β不同亚型在尿道瘢痕组织中的表达存在显著性差异，TGF-β1表达呈强阳性，TGF-β2为弱表达，TGF-β3未见表达，TGF-β1过强表达与尿道瘢痕过度增生可能存在相关性。 4．利用脂质体介导下TGF-β1寡核苷酸瞬时转染体外培养的人尿道瘢痕成纤维细胞，RT-PCR半定量发现反义TGF-β1寡核苷酸使成纤维细胞自表达TGF-β1的量显著下降。 5．转染后Elisa法检测结果显示反义TGF-β1寡核苷酸能明显降低成纤维细胞对细胞外基质Ⅰ型胶原的合成、分泌。 6．MTT实验发现反义TGF-β1寡核苷酸对成纤维细胞增殖活性有显著性抑制作用。