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HOXD10基因在人类乳腺癌中的表达研究

摘要目的:探讨同源异型盒基因HOXD10基因在乳腺癌发生、发展进程中的作用,及其表达异常与临床病理参数之间的相关性。 方法: 1、收集44例新鲜乳腺癌组织及16例乳腺良性病变组织标本,将其分为乳腺癌组及乳腺良性病变组,组织离体后20分钟内置于液氮中,后转入一80℃冰箱保存。 2、采用Trizol法抽提组织总RNA,提取得到的RNA采用M-MIV逆转录试剂盒逆转录合成cDNA第一链。 3、从GeneBank检索human 18s rRNA和HOXD10基因的全长序列,采用oligo 6.0引物设计软件分别设计18s rRNA和HOXD10基因的引物。 4、以cDNA为模板,经PCR反应分别扩增18s rRNA和HOXD10基因片断,制备相对定量标准品。5、以逆转录得到的cDNA为模板,进行实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(Realtime RT-PCR),检测44例乳腺癌组织及16例乳腺良性病变组织HOXD10 mRNA表达,并分析HOXD10mRNA表达与乳腺癌临床病理资料间的相关性。 结果: 1、用制备的相对定量标准品绘制的实时荧光定量:RT-PCR试验的标准曲线,HOXD10基因标准曲线斜率(slope)为-4.120,相关系数(correlationcoefficient)为1.00。18s rRNA基因荧光定量RT-PCR试验的标准曲线斜率(slope)为-3.863,相关系数(correlation coefficient)为1.00。均符合要求。 2、HOXD10mRNA在乳腺癌中表达范围为3.26~75.00,均值为25.25,在乳腺良性病变中表达范围为11.98~162.50,均值为78.32。乳腺癌中HOXD10 mRNA的表达明显低于乳腺良性病变,两组间有显著差异(P<0.01)。 3、组织学分级为Ⅲ级的标本中HOXD10 mRNA的表达明显低于其它2个组别。 4、HOXD10 mRNA的表达与淋巴结转移、肿瘤大小、TNM分期之间未见相关性(P>0.05)。 结论: 1、乳腺癌组织HOXD10 mRNA表达明显降低,且组织学分级为Ⅲ级的标本中HOXD10 mRNA的表达明显低于其它2个组别,考虑该基因可能为乳腺癌发生发展的抑制因子,提示我们对该基因应该给予更多关注。 2、本次实验未发现HOXD10 mRNA表达减少与淋巴结转移、肿瘤大小、TNM分期之间有明显相关性,此结论仍需进一步行大样本实验证实。 3、本实验所用SYBR GREENⅠ实时荧光定量RT-PCR技术,选择新的相对定量方法,既能够准确定量,又有特异性强、灵敏度高等特点,同时极大简化了实验过程及试剂消耗,因此该方法适用于不同样品间mRNA表达量的比较。

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