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乙肝表面抗原及其抗体压电免疫传感器阵列的应用研究

摘要中国不仅是一个人口大国,而且也是病毒性肝炎的高发区,仅乙肝病毒携带者就达1.5亿之多。目前常用的乙肝标记物项目有三个抗原抗体系统,其中乙肝表面抗原及其抗体的检测是临床诊断乙肝的一项重要指标。目前常用酶联免疫吸附测定和放射免疫法检测,但都有其局限性。压电免疫传感器具有装置简单、价格便宜、灵敏度高、实时快速和无需标记等优点,其工作原理和传统的免疫测试法相似,广泛应用于食品检验、环境监测、药物分析等多个领域。 本论文研究目的是在前期研究基础上,构建压电免疫传感器检测平台,通过大量临床验证并与酶联免疫试验对比,以探索产业化的可行性,为乙肝病毒的临床检测方法提供了新的方法学依据。 方法:首先分别采用戊二醛交联法、纳米金自组装法和生物素一亲和素法,并从抗体固定、频率响应特性以及产业化前景等方面比较了三种方法的优劣,选择出最佳方法。其次比较了镀金膜和镀银膜芯片的响应特性,并对实验条件进行优化。最后,研究压电免疫传感器阵列检测方法的特异性响应及标准曲线制作,非特异性响应,临床标本的检测和方法学比较,以及储存时间的研究。 实验结果:经过实验研究采用镀银膜芯片,固定方法为戊二醛交联法,通过实验优化,确定了戊二醛浓度为2.5%,PBS pH值为7.4,牛血清白蛋白(BSA)浓度为1%,免疫反应时间为40min时,信噪比达到最大。得到传感器阵列检测乙肝表面抗原及其抗体的检出限分别为:1.0gg/mL和32.0gg/mL,检测灵敏度优于ELISA法。利用压电免疫传感器阵列对50例临床标本分别进行乙肝表面抗原及其抗体检测,结果表明,压电免疫传感器阵列的检测结果同传统免疫分析方法相比吻合度较高,可用于乙肝表面抗原及其抗体的临床检测,为乙肝表面抗原及其抗体的联合检测提供了一种简便、快速的新方法。

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