溃结安对大鼠IL-6基因mRNA水平的影响及pSilencer干扰载体的构建-论文-万方医学网

溃结安对大鼠IL-6基因mRNA水平的影响及pSilencer干扰载体的构建

二维码有效期 120s

收藏纠错

摘要目的：研究溃结安对溃疡性结肠炎(Ulcerative colitis，UC)大鼠白细胞介素-6(interleukin 6，IL-6)基因mRNA水平的影响及构建具有特异性阻断大鼠IL-6基因的小干扰RNA(small interferening RNA，siRNA)表达体系，为确定溃疡性结肠炎发病基因及研究维药西帕依溃结安治疗溃疡性结肠炎作用机理提供新的方法。方法：Wistar大鼠分为正常组，溃疡性结肠炎模型组，生理盐水阴性对照组组，5-氨基水杨酸阳性对照组，溃结安干预组共5组，采用2，4-二硝基氯苯(DNCB)复合乙酸方法造成溃疡性结肠炎大鼠模型，从结肠中提取总RNA经逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)得到目的基因的cDNA，经PCR得到目的基因的扩增片段。应用siRNA设计软件在大鼠IL-6的mRNA上寻找特异性的短核苷酸序列并设计合成两条互补的小发夹结构的DNA序列，经退火后形成双链DNA片段，采用基因克隆技术，将其克隆到pSilencer<'TM> 1.0-U6的载体中，转化DH5a大肠杆菌，提取质粒，酶切方法和测序法对重组体进行鉴定。结果：溃结安降低了大鼠IL-6基因mRNA水平。酶切和序列测定表明，成功构建了大鼠IL-6基因的siRNA表达体系。结论：大鼠IL-6基因表达的变化可能与溃疡性结肠炎的发生发展相关联；溃结安治疗作用可能与其下调了IL-6基因表达有关：成功构建siRNA表达体系，为确定溃疡性结肠炎发病基因及研究维药溃结安治疗溃疡性结肠炎的靶点打下了基础。