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M-007光化学病毒灭活法应用于血浆病毒灭活的研究

摘要酚噻嗪染料亚甲基兰(MB),作为一种光敏剂应用在血浆病毒灭活中,已经在欧洲使用多年。M007是中国医学科学院输血研究所自主设计、合成的一种MB衍生物,在红细胞病毒灭活研究中效果良好。本文主要研究它在血浆病毒灭活中的应用。 本研究首先挑选了三种光源,分别是红光二极管(Red LED),荧光灯和白光二极管,以初步考察其对病毒灭活效果及血浆中凝血因子Ⅷ活性的影响。实验表明,红光二极管灭活6log病毒所需的时间最短,同时它对血浆凝血因子Ⅷ的损害也最小,是最适合的光源。 然后,考察了上述经过优化的M007结合红光二极管照射的血浆病毒灭活处理方法对血浆中主要蛋白质成分含量和活性的影响。 研究表明:处理后血浆中保留的凝血因子Ⅷ促凝活性(FⅧ:C)、凝血因子Ⅴ促凝活性(FⅤ:C)分别为处理前的85.8±7.9%和87.66±10.78%,纤维蛋白原凝固活性(Fbg:C)为80.29±2.92%,可凝固纤维蛋白原含量为72.98±8.49%。处理后血浆中保留的抗凝蛋白成分,抗凝血酶-Ⅲ(ATⅢ)活性和α<,2>-巨球蛋白(α<,2>-M)含量分别为87.07±9.41%和72.89±2.40%。此外,还考察了活化部分凝血活酶时间(APTT)和凝血酶原时间(PT)在血浆处理前后的活性变化,并对其结果进行了讨论。同时,以Anti-HBs为代表,考察了上述血浆病毒灭活处理方法对血浆中抗体活性的影响,血浆中Anti-HBs在处理后的活性为处理前86.37±25.12%。经过用处理前后血浆和其抗血清的双向免疫扩散和Native-PAGE实验,证明血浆处理后没有新抗原产生。 结论:本研究所建立的M007结合红光二极管照射的方法,在有效灭活病毒的前提下,对考察的血浆中主要蛋白质成分的功能和活性无显著损害,可望用于临床用新鲜冰冻血浆的病毒灭活处理。

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