检索历史 清除

摘要本文采用由差异显示技术从大鼠血糖调节模型中克隆得到一个血糖调节相关基因作为研究对象，即葡萄糖刺激后表达上调的Prominin基因。Prominin属于一个新的五次跨膜糖蛋白家族，该家族与任何已知蛋白均无明显同源性，且特异性定位于细胞膜突起的顶端。目前，这个蛋白家族的生物学功能尚不明了，仅能够根据些许线索推测出其与细胞骨架关系密切。 本文在细胞水平对Prominin与葡萄糖代谢之间的关系进行了研究。在大鼠L6肌管细胞中，采用real-time PCR技术对葡萄糖刺激后的Prominin mRNA水平进行检测后发现，随着葡萄糖刺激时间的延长，其mRNA的含量也逐渐升高。这与大鼠整体实验模型中得到的结论一致。在野生型不表达Prominin的MDCK肾小管内皮细胞中，使用自制的抗Prominin多克隆抗体通过免疫共沉淀技术得到Prominin蛋白，对其进行体外磷酸化实验，发现了包括第二个胞内区在内的多个PKC磷酸化位点。采用高浓度葡萄糖和胰岛素分别刺激诱导完全的L6肌管细胞，发现葡萄糖能够引起Prominin磷酸化程度呈现先轻度增加、后大幅下降的变化，而胰岛素能够逆转该变化，使之对葡萄糖刺激不敏感。 根据Prominin的亚细胞定位特征和其他实验室的研究结果，我们探讨了其参与细胞骨架运动的可能性。在野生型不表达Prominin的MDCK细胞中，Prominin的表达使之形态发生明显改变，细胞体积变大，边界清晰，出现大而细长的突起，呈分散生长：也使：MDCK细胞的迁移能力显著增强，达到对照的4倍以上。采用酵母双杂交技术对大鼠骨骼肌文库进行筛选，得到了与Prominin第一个胞内区结合的细胞骨架蛋白Myotilin，并且免疫共沉淀和细胞内共定位的实验结果也验证了所述结合的存在。在L6细胞中，随着细胞的接触和分化，Prominin蛋白的含量逐渐下降；随着细胞的死亡和去接触，其蛋白含量逐步增加。 基因芯片是近年来出现的新技术，可用于高通量研究基因表达谱，筛选差异表达基因。通过该技术，我们对42例2型糖尿病患者和正常对照的骨骼肌和脂肪组织进行了表达谱研究，分别得到了25个和39个差异表达基因。