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摘要肿瘤的早期，机体的免疫功能通常处于正常状态。由于HLA基因控制着T细胞及NK细胞介导的免疫应答中心分子的表达，肿瘤细胞往往“借用”各种HLA Ⅰ类分子下调或缺失的表型以逃避机体的免疫监视。 本实验室近几年以肝癌高发的江苏启东地区为研究现场。通过免疫组织化学染色发现在165例肝癌组织较癌旁组织中，除了LMP2分子之外，HLA Ⅰ类各分子均有不同程度的上调，其中以HLA Ⅰ类分子A位点上调最明显(54％)。新鲜收取的36例肝癌和癌旁组织中，RT-PCR．及Western Blot的结果也进一步证实肝癌中HLA Ⅰ类及相关分子上调趋势的存在，而且HLA Ⅰ类分子的异常表达在转录水平和蛋白水平上存在显著相关性，由此推测肝癌中HLA Ⅰ类分子异常表达的调控可能发生在相关基因转录之前。此外还发现肝癌中存在HLA Ⅰ类各分子表达一致，多例组织中HLA Ⅰ类各分子的表达同时上调的表型。提示在肝癌中可能存在某一种上游分子诱导所有HLA Ⅰ类相关分子同时表达增加。 本研究以肝癌细胞系为模型，从转录水平研究HLA Ⅰ类分子表达上调可能存在的机制。探寻可能引起肝癌组织中HLA Ⅰ类各分子同时上调的上游刺激分子。分析肝癌HLA Ⅰ类分子表达上调可能的意义。 研究结果表明： 一、选用相对低表达HLA Ⅰ类分子的肝癌细胞系BEL7405为对照，以高表达HLA Ⅰ类分子的肝癌细胞系QGY7701和BEL7402为研究对象。HLA-A重链分子在转录水平的增加是引起这两株肝癌细胞系HLA Ⅰ类分子表达上调的关键因素，而其它抗原加工递呈分子改变不明显。进一步研究发现在这两株肝癌细胞系中，HLA-A启动子区域无序列改变。荧光素酶实验提示顺式作用序列ISRE、enhA在肝癌细胞系QGY7701和BEL7402中转录活性增高是介导HLA-A重链表达增加的重要因素。EMSA、RT-PCR及Western Blot也显示与ISRE、enhA结合的转录因子IRF-1及核内1965在QGY7701和BEL7402中表达增加。细胞转染实验进一步证实IRF-1及核内065与HLA-A重链表达增加之间的因果关系。二者均可增加HLA-A的表达量，但p65作用更为显著，而且存在叠加作用。同时，在肝癌组织中也检测到相关转录因子IRE-1和核内p65与HLA-A重链的协同上调。提示这两种分子在肝癌HLA Ⅰ类分子表达增加中起重要作用。但这两类因子活化的信号刺激来源以及与HBV感染的相关性还需要进一步研究。 二、免疫组织化学方法和RT-PCR方法检测肝癌组织标本中HLA Ⅰ类分子与PML间的关系，以期寻找到可能引起肝癌组织中HLA Ⅰ类各分子同时上调的上游刺激分子。结果提示：PML与HLA重链表达上调存在显著相关性(x<'2>=5.587，P<0.05)，推测PML可能是影响HLA上调的因素之一。以肝癌细胞系QGY-7701及BEL-7405为模型，研究发现在高表达HLAⅠ类分子复合物的细胞系QGY-7701中，其PML的含量也较BEL-7405多。外源性将PMLIV转染入低表达HLAⅠ类分子复合物的细胞系BEL-7405中，可使BEL-7405中与HLA Ⅰ类分子相关的基因均有增加，其中TAP、LMP等加工递呈分子有明显改变，也可使递呈到细胞表面的HLA Ⅰ类分子复合物略有增加。结果提示PML可能是影响肝癌HLA Ⅰ类分子上调的因素之一。但其通过何种机制调节APM各因子的增加还需要进一步研究。 三、应用MTT法检测NK92细胞系对表达不同量HLAⅠ类分子的肝癌细胞系BEL-7405，QGY-7701的杀伤活性的影响。转染p65入低表达HLA Ⅰ类分子的细胞系BEL-7405后，细胞总HLA-A增加、细胞表面HLA Ⅰ分子复合物表达增加，可使NK92对其杀伤明显受到抑制。肝癌中高表达HLA Ⅰ类分子，抑制NK细胞的杀伤，可能是肝癌逃避免疫监视的机制之一。 以上研究结果提示与HLA-A启动子区域顺式作用序列ISRE、enhA结合的转录因子IRF-1和1965表达增多是引起肝癌细胞系HLA Ⅰ类分子表达上调的关键因素。这也是肝癌组织中HLA Ⅰ类分子增加的重要分子机制。肝癌HLA分子高表达可能与肝脏中NK数量多，逃逸NK细胞杀伤有关，是肿瘤细胞逃逸天然免疫监视的机制之一。此外，PML基因在肝癌中的高表达可能也是导致HLA Ⅰ类分子表达上调的原因之一。