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摘要目的:利用2型重组腺相关病毒载体介导FasL基因转导大鼠骨髓来源DC和活体肾脏，观察转导后FasL基因的表达，为进一步研究FasL转基因在同种异体器官移植中的作用奠定基础。 方法：1．构建穿梭质粒pSNAV2.0-FasL-IRES-EGFP，通过脂质体转染BHK-21细胞，经G418筛选，获得载体细胞株BHK/FasL-IRES-EGFP；2．利用重组1型单纯疱疹病毒(HSV1-rc/△UL2)感染载体细胞，获得重组腺相关病毒；3．通过氯仿抽提、冰乙醇沉淀法纯化、浓缩重组腺相关病毒，SDS-PAGE检测其纯度，地高辛标记探针点杂交测定其滴度；4．重组腺相关病毒载体介导FasL基因转导原代培养的大鼠骨髓来源DC，RT-PCR、流式细胞仪、荧光显微镜检测其表达；5．用生理盐水或重组腺相关病毒经肾动脉灌注大鼠左肾，并使之于左。肾内滞留45分钟，3周、5周、7周后处死大鼠取肾脏标本，通过RT-PCR、HE染色和ICH，检测FasL表达以及评价肾脏的组织形态变化。 结果: 1．成功构建了穿梭质粒pSNAV2．0-FasL-IRES-EGFP； 2．获得了重组腺相关病毒，经纯化、浓缩后，SDS-PAGE检测其纯度达98％以上，地高辛标记点杂交测定其滴度为1×10<'12>vg/ml； 3．rAAV2-FasL-IRES-EGFP转导大鼠骨髓来源的DC，48小时后才可以观察到绿色荧光蛋白的表达，随着时间的延长逐渐增多，至第7天左右，到达高峰，以后维持这一水平；通过流式细胞仪检测最高峰时DC表面GFP的表达效率为18％左右；同时通过RT-PCR也证实了FasL基因的表达； 4．rAAV2-FasL-IRES-EGFP转导活体肾脏后，HE染色证实其未引起肾脏组织的异常形态学改变；RT-PCR和ICH证实了FasL 基因表达但局限于肾小管上皮细胞。 结论 1．成功制备了FasL基因重组2型腺相关病毒； 2．rAAV介导的FasL基因成功转导大鼠骨髓来源的DC，效率较低，但基因的表达较长期稳定； 3．rAAV介导的FasL基因肾脏活体转导对肾脏无害，目的基因可以在大鼠肾脏内较长期稳定表达，但局限于肾小管上皮细胞。