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摘要人类细胞色素P450(Cytochrome P450，CYP)是代谢许多重要的内源性和外源性化合物及其前致癌物的一类氧化酶。其中CYP3A4是最重要的P450酶之一，参与45-60％常用药物在体内的代谢转化过程。CYP3A4酶活性具有明显的个体差异，不仅表现为肝脏表达水平差异高达40倍，且其底物的体内代谢也可相差10倍左右。在CYP3A4活性的个体差异中，基因作用占60--90％，其中最主要的原因是CYP3A4的基因多态性。目前，许多CYP3A4等位基因已被发现，并进一步证实是造成个体之间药物代谢差异的一个重要因素。 选取7个天然存在的SNPs，利用PCR定点突变方法在CYP3A4野生型基因中引A,SNPs，选择适合酵母表达体系的载体pYES2/CT进行基因克隆。测序后，用半乳糖诱导重组子在酵母系统中进行表达，采用差速离心法制备含CYP3.A4重组酶的S9微粒体。并用CYP3A4特异性荧光底物DBF(Dibenzylfluorescein)和BOMCC以及其探针底物nifedipine进行酶催化活性和动力学的实时检测，所得的数据可用非线性回归分析法计算Km值和Vmax值。同时使用CYP3A4野生型及其7个SNPs突变株微粒体蛋白在该系统中对六大类共8种药物进行高通量筛选，以便研究单核苷酸多态性对药物代谢的影响。 对CYP3A4野生型及其突变株的研究表明：用酿酒酵母表达人的药物代谢酶是研究与药物代谢相关问题的一个很好途径。微粒体荧光检测和色谱检测结果显示，CYP3A4野生型具有较强催化活性，获得的酶动力学参数‘Vmax和Km与已公布的相近。另外，与CYP3A4野生型相比，突变株R1 62Q，L293P，M445T和P467S代谢底物的能力没有显著改变，而T185S，F189S和$222P的活力均有不同程度的下降，其中F189S的活力最低，达到CYP3A4野生株的1/10。对六大类共8种药物进行高通量筛选可以看出，同种药物对不同种重组酶的抑制程度不同，不同种药物对同一种重组酶的作用情况也不相同。但总的来说，各种药物对CYP3A4野生型和突变体蛋白的抑制趋势大体一致。并且，随着孵育时间的延长，所选药物对CYP3A4野生型和突变体蛋白的抑制程度保持不变，其IC50值基本不变。 多种荧光底物、探针底物和大量的上市药物对人细胞色素P450 3A4野生株及其突变株的体外代谢研究正在进一步进行中，旨在建立一种高通量、简便、快捷的针对于CYP3A4遗传多态性的药物筛选平台，从而为临床个体化用药提供科学依据。