检索历史 清除

摘要随着降脂药在全球市场的持续升温、他汀类半合成降血脂原料药在全球的需求有很大增长空间，各企业之间竞争越来越激烈。为适应市场竞争的需要，提高普伐他汀生产水平，增加经济效益，本研究室通过采用自然选育法：紫外线、亚硝酸以及紫外线一氯化锂人工选育复合诱变原生质体法；原生质体灭活及融合法对普伐他汀(NNR-525-G1)菌株进行了选育研究，试图提高菌种选育的收率，获得一定的经济效率。利用比较容易获得的热、紫外线、亚硝酸对原生质体进行灭活处理，获得了上述三种灭活剂对原生质体临界致死条件。同时，利用PEG成功地诱导了原生质体的种间融合，对融合菌株进行生化指标的检测分析，证实了融合子的真实性。对以上三种方法进行摇瓶水平测试，进行对照比较。 本文还对原生质体灭活方法及原生质体融合机理进行了有益的讨论。首先用自然选育法对普伐他汀(PRAVASTATIN)(NNR-525-G1)菌株进行了选育研究；再用紫外线、亚硝酸以及紫外线-氯化锂人工复合诱变法对普伐他汀(NNR-525-G1)菌株的原生质体进行了选育研究；最后用原生质体灭活及融合法进行此菌株进行了选育研究，获得了原生质体的对温度、紫外线、亚硝酸的临界致死剂量；并以普伐他汀(NNR-525-G1)和普伐他汀(NNR-626-G4)为亲本，PEG为融合剂，成功地实现了种间灭活原生质体融合；并对获得的融合再生菌株进行分析检测，初步确定4株为种间融合子，最后将三种方法选育出来的菌株进行摇瓶验证。结果如下： 1、自然选育法选育出的菌株经摇瓶考察，得到10、35、40号菌株，摇瓶验证水平比其亲本NNR-525-G1分别高5.10％、7.23％、6.35％，将它们分别命名为NNR-525-B10、NNR-525-B35、NNR-525-B40。 2、普伐他汀NNR-525-G1菌株原生质体经紫外线、亚硝酸以及紫外线一氯化锂复合诱变，得到102号突变菌株，经摇瓶考察，得到58、64、69、90号菌株，其摇瓶水平比对照株分别高16.16％、18.50％、17.61％、15.90％，将它们分别命名为NNR-525-M58、 NNR-525-M64、NNR-525-M69、NNR-525-M90。 3、原生质体融合后获得的再生菌株，经融合子的检测分析，初步确定4株为融合株，经摇瓶考察，得到15、19、21、46号菌株，其水平比对照株分别高28.00％、25.07％、28.28％、31.25％，将它们分别命名为NNR-525-626-15、NNR-525-626-19、NNR--525-626-21、NNR-525-626-46。 试验证明：自然选育的目的性很强，但费时费力，但收率较低；人工诱变育种的遗传突变率较大，存在着一定的盲目性：杂交育种通过选择适当的亲本就可能从杂交后代中选育出具有双亲优良性状的菌株，具有一定的定向性，但由于细胞壁的存在使杂交育种受到限制。基于这一点，新兴的原生质体融合育种技术便应运而生。