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摘要目的： 研究肝星状细胞(HSC)中H2S合成酶-胱硫醚-γ-裂解酶(CSE)的表达和其自分泌硫化氢(H2S)的现象及其可能的影响因素；观察H2S对HSC内钙离子浓度的影响，探讨UES对HSC收缩功能的影响及其机制。 材料与方法： 鼠肝星状细胞系(HSC-T6)：来自北京友谊医院肝病中心实验室，为SV40转染SD大鼠肝星状细胞，并经低浓度胎牛血清培养基选择而成，其表型为活化的HSCs。 一、肝星状细胞合成分泌H2S及其影响因素复苏后的HSC-T6用含5％小牛血清的DMEM制备细胞悬液并接种HSC于培养瓶中，每瓶细胞数为5×105个，上清液为4ml，继续孵育24小时。24小时后，加入不同的药物继续培养24/小时，亚甲基蓝分光光度法测定细胞硫化氢生成率。 二、肝星状细胞CSE mRNA的表达及其影响因素根据MTT实验结果，选择合适的药物浓度。复苏后的HSC用含5％小牛血清的DMEM制备细胞悬液并接种HSC于培养瓶中，每瓶细胞数为5×105个，上清液为4ml，孵育24小时。加入不同的药物[Hemin(血红素氧合酶-1/HO-1诱导剂)，10μmol/L，L-NAME(一氧化氮合酶/eNOS抑制剂)，300gmol/L]继续培养24小时，提取RNA，采用RT-PCR方法检测不同细胞组的CSE mRNA的表达情况。 三、硫化氢对HSC-T6合成分泌一氧化氮、一氧化碳的影响12孔板各孔内分别放置一无菌盖玻片，然后将HSC接种于各孔内，每孔细胞数为1 x 105个；以含5％FCS的DMEM 2ml为培养上清液。37℃条件下，于CO2培养箱内培养24小时；加入不同浓度NaSH，换液后继续培养24小时。细胞上清液进行iNOS活力及NO的测定。制作细胞片，免疫细胞化学观察iNOS、HO-1变化。 四、不同浓度的外源性H2S供体-NaSH对肝星状细胞内钙离子浓度的影响复苏后的HSC用含5％小牛血清的DMEM细胞培养液制备为1×105/ml的HSC悬液，接种于35 mm玻底培养皿(皿中微孔的直径为10 mm)中，培养液总体积为2ml。37℃条件下，HSC于CO2培养箱内继续培养24+时后进行Fluo-3/AM的负载。利用激光共聚焦显微镜所配备的数据与图像处理软件，计算出加药前后细胞的荧光强度的变化。 　　结果： 一、肝星状细胞具有自分泌H2S的功能；HO-1诱导剂、eNOS抑制剂对细胞H2S生成率有抑制的趋势，但无统计学差异；DL-PPG(CSE抑制剂)实验组硫化氢的生成率较对照组明显降低，DL-PPG能显著抑制细胞硫化氢的生成，提示CSE在肝星状细胞H2S的合成中发挥重要的作用。 二、肝星状细胞可表达CSE mRNA；L-NAME、Hemin均抑制HSC CSE mRNA的表达[(O．57±0.06)VS．(0.78±0.13)，P<0.05]/[(0.47±0.06)vs．(0.78+0.13)，P<0.05]。提示H2S、NO、CO在HSC的功能调节中有相互关系。 三、100μmol/L的NaSH降低HSC iNOS活力，[(1.08±0.72)vs．(3.06±0.68)，P<0.05]。NO的生成也明显降低，[(2.12±0.39)vs．(3.58±0.59)，P<0.05]；细胞免疫化学染色结果显示NaSH可能有促进HO-1表达的作用，且随着NaSH浓度的增加，HO-1有表达增加的趋势。 四、100μmol/L的NasH可显著降低HSC内[Ca2+][(16.20±3.56)vs．(14.12±3.76)，P<0.05]格列本脲阻断KATP通道后，100μmol/L的NaSH对细胞内Ca2+浓度无明显影响(P>0.05)；加入较高浓度的NaSH(1mmol/L)后HSC内[Ca2+]明显升高[(16.77±4.03)vs．(18.06±4.91)，P<0.05]。 结论： HSC中有CSE的表达，HSC可以合成与分泌H2S；一定浓度的NaSH可能通过激活KATP通道，降低细胞内钙离子浓度，诱导HSC的舒张；本实验结果显示，CO、NO、H2S三种气体信号分子的相互影响复杂。