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摘要Luman募集因子(Luman-recruiting factor，LRF)是碱性亮氨酸拉链蛋白转录因子，是Luman活化过程中必需的辅助因子，募集Luman进入特定的亚核区，促进有活性的转录复合物的形成。目前，对于LRF的生理功能尚不清楚，获得其单克隆抗体对于研究LRF的生理功能有非常重要的意义。 本研究测定分析了GST-LRF融合蛋白在E.coli BL21(DE3)中高效表达的条件，以纯化的目的蛋白作为抗原，免疫BALB/C小鼠，制备单克隆抗体并进行鉴定。获得以下结果： 1. GST-LRF融合蛋白(glutathione S-transferase，GST)在E.coli BL21(DE3)中高效表达的条件为：37℃、0.1 mmol/L IPTG、诱导表达5 h。电洗脱法纯化得到了高纯度的目的蛋白。 2.确定了检测抗GST-LRF融合蛋白抗体的间接ELISA的最佳作用条件：辣根过氧化物酶标记山羊抗小鼠IgG(酶标二抗)的工作浓度为1：1 200：包被抗原为10μg/mL；包被液为pH 8.6，0.05M碳酸盐缓冲液；包被条件选择37℃作用2h或4℃过夜；封闭液为1.0％明胶，封闭条件为37℃作用1h。 3.用间接ELISA筛选阳性孔，通过有限稀释法筛选出3株分泌抗GST-LRF单克隆抗体的杂交瘤细胞株：A2EA、B2G6、D2F5。 4.采用腹水诱生法制备了A2E4、B2G6、D2F5 3株杂交瘤细胞的单克隆抗体，间接ELISA测定腹水抗体效价均为1：10 000，交叉性试验表明制备的单抗具有特异性，ELISA测定抗体的相对亲和力分别为：0.773 1.μg/mL、0.800μg/mL和0.355μg/mL。