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摘要一、目的 药物成瘾是一种慢性、复发性脑病，药物成瘾包括药物耐受、依赖和渴求，后者是药物成瘾的特征。成瘾一旦形成，可能成为伴随一生的状态，即使经过长时期戒断，也会表现出强烈的渴求以及有复吸的高度危险性。目前认为大脑局部血流量的变化和异常的学习记忆与成瘾的形成和复吸有密切联系，其分子、细胞机制尚不明确。从某种角度上，成瘾也是一种记忆，通过篡夺正常生理神经通路而产生比正常生理反应更强的可塑性，进而形成有害异常记忆。成瘾和学习记忆有很多神经通路甚至分子机制上的交叉。 药物反复作用可能会使大脑局部血流量(regional cerebral blood flow, rCBF)、长时程增强(long-term potentiation，LTP)发生改变，海马CA1区对缺血、缺氧较敏感并参与学习和记忆。在吗啡精神依赖的形成至复吸全过程中，海马CA1区功能(rCBF)结构、LTP及其NMDA受体信号传导的动态变化至今尚未系统阐明。 条件性位置偏爱(conditioned place preference，CPP)模型是研究成瘾性药物奖赏效应、动机效应的模型，特别是用于对药物精神依赖的研究，同时CPP模型也是研究药物诱发动物寻药行为机制及关联学习能力的有用模型。本研究建立吗啡诱导大鼠CPP形成、消退、重建模型，测定上述三阶段海马CA1区rCBF、神经元的超微结构的变化，以阐明在吗啡精神依赖全过程中海马CA1功能(rCBF)和形态学的改变；用电生理学方法记录吗啡精神依赖全过程海马CA1区LTP的变化，以探讨海马CA1区突触可塑性变化在吗啡精神依赖全过程中作用；用免疫组化的方法检测吗啡精神依赖全过程中与海马CA1区rCBF、LTP变化密切相关的NMDA受体信号传导分子如NR2B受体亚型、NR2A受体亚型、钙依赖钙调蛋白激酶Ⅱ(Ca2+/calmodulin dependent protein kinase Ⅱ，CaMK Ⅱ)、cAMP反应元件结合蛋白(cAMP response element binding protein，CREB)的动态变化，以阐明NMDA受体信号传导在吗啡精神依赖全过程中作用及可能机制。 二、方法 建立吗啡诱导大鼠CPP形成、消退、复燃三阶段模型，用激光多普勒血流仪测定上述三阶段海马CA1区rCBF变化，用透射电镜观察各阶段海马神经元的超微结构的变化。用电生理学方法记录吗啡精神依赖三个阶段海马CA1区LTP的变化；用免疫组化的方法检测吗啡精神依赖三个阶段中海马CA1区NR2A、NR2B受体亚型、CaMKⅡ、CREB蛋白的动态表达。 三、结果 (一)吗啡诱导的CPP模型 1、10mg/kg吗啡组大鼠在伴药箱停留时间(s)显著长于生理盐水对照组(P＜0.05)，提示成瘾大鼠已建立对伴药箱的偏爱。 2、经过10天的生理盐水消退训练后，吗啡组与生理盐水对照组相比，两组动物在伴药箱停留的时间无明显差异(P＞0.05)，提示CPP已消退。 3、小剂量吗啡(2.5mg/kg)作用后，吗啡组大鼠在伴药箱停留时间长于生理盐水对照组(P＜0.05)，提示CPP复燃。 (二)吗啡诱导CPP建立、消退、重建三阶段海马CA1区rCBF，神经元超微结构的变化 1、吗啡CPP建立、消退、重建三阶段中吗啡组大鼠海马CAl区rCBF较生理盐水组下降(P<＜0.05). 2、上述吗啡精神依赖三阶段中大鼠海马CA1区部分神经细胞肿胀、固缩、神经毡灶性水肿、有髓神经鞘分离、线粒体肿胀、内质网扩张、轴突、树突灶性水肿，而生理盐水对照组未见异常，以上结果提示在吗啡精神依赖形成一消退-复燃全过程中，海马CA1区发生了功能和结构的变化，这些变化可能参与吗啡精神依赖和复吸的形成。 (三)吗啡诱导CPP建立、消退、重建三阶段海马CA1区LTP的变化 1、CPP建立阶段，吗啡组大鼠海马CA1区LTP较生理盐水组增大(P＜0.05)。 2、CPP消退阶段，吗啡组大鼠海马CA1区LTP与生理盐水对照组比较无显著性变化(p＞0.05)。 3、吗啡CPP重建阶段，吗啡组大鼠海马CA1区LTP较对照组增大(P＜0.05)。提示在上述三个阶段中，海马CA1区LTP发生动态变化。海马CA1区突触可塑性的动态变化参与了吗啡精神依赖及复吸。 (四)吗啡诱导CPP建立、消退、重建三阶段海马CA1区NR2A、NR2B受体亚型、CaMKⅡ、p-CREB表达的变化 1、吗啡CPP建立阶段，吗啡组大鼠海马CA1区NR2A受体亚型蛋白表达与生理盐水组比较无显著性差异(P＞0.05)。而NR2B受体亚型、CaMKⅡ、p-CREB表达较生理盐水对照组增加(P＜0.01)。 2、吗啡CPP消退阶段，吗啡组大鼠海马CA1区NR2A、NR2B、CaMKⅡ、p-CREB表达与相应生理盐水对照组比较无显著性变化(p＞0.05)。 3、吗啡CPP复燃阶段，CPP消退后，给予小剂量吗啡，重新诱导CPP出现，吗啡组大鼠海马NR2A表达量较生理盐水对照组无明显变化(P＞0.05)，而NR2B、CaMKⅡ、p-CREB表达量较对生理盐水照组增加(p＜0.01)。 以上结果提示海马CA1区NR2B受体亚型、CAMKⅡ、p-CREB参与了吗啡CPP建立和复燃。 四、结论 1、海马CA1区功能和结构的改变(海马CA1区rCBF的下降和CA1区神经元细胞器超微结构的缺血、缺氧性改变)参与了吗啡精神依赖的形成和复吸。 2、海马CA1区的LTP动态变化参与吗啡精神依赖的形成和复吸。 3、海马CA1区rCBF的下降和海马CA1区LTP的变化可能通过激活NMDA受体信号传导通路参与吗啡精神依赖的形成和复吸。 4、海马CA1区在吗啡精神依赖的形成和复吸中具有重要作用，其原因可能是通过对rCBF和LTP及其相关NMDA受体信号传导的调节而发挥作用；NR2B亚型、CaMKⅡ、CREB参与吗啡精神依赖的形成和复吸。 5、本研究首次从海马CA1区：rCBF、LTP变化及其NMDA受体信号传导的角度系统阐明了海马CA1区在吗啡精神依赖和复吸形成过程中的作用及可能机制，为今后药物成瘾和复吸的基础、临床研究和治疗提供新的思路。