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摘要目的: 研究UVA照射对体外培养的皮肤成纤维细胞rGF-β1、IGF-1、KGF，VEGF分泌的影响；探讨rGF-β1对LJVA照射后体外培养的皮肤成纤维细胞的活性及Ⅰ型、Ⅲ型胶原合成影响及对UVA照射导致的线粒体脱氧核糖核酸(mtDNA)缺失有无保护作用。为光老化提供新思路。 方法: 1.取年轻成人包皮成纤维细胞培养传代，用第5代细胞做实验对象，进行细胞分组，采用不同计量的UVA(5 J/cm2、10J/cm2、20J/cm2)照射，设立对照组(0J/cm2)，建立成纤维细胞光老化模型，培养24h后采用酶联免疫法(ELISA)测定照射后体外培养的皮肤成纤维细胞上清液中TGF-β 1、IGF-1、KGF、VEGF含量。MTT法检测照射后细胞增殖活性，酶联免疫法(ELISA)测定UVA照射皮肤成纤维细胞上清液中Ⅰ型、Ⅲ型胶原； 2.将细胞接种在6孔板上，浓度为1×105/ml，以UVA15J/cm2照射成纤维细胞。细胞分为5组，即正常对照组(对照组不照射也不加入。TGF-β1，只加入等量PBS)、UVA单纯照射组(TGF-β1 0ng/ml)、小剂量组(UVA+TGF-β1 0.1 ng/ml)、中剂量组(UVA+TGF-β1 1 ng/ml)、大剂量组(UVA+TGF-β1 10.0 ng/ml)。照射前2h加入含不同浓度TGF-β1PBS液各3ml，培养板置入37℃恒温水浴箱中，照射后置换含10％小牛血清的DMEM置入培养箱中继续培养，24 h后收样。MTT法检测照射后细胞增殖活性，酶联免疫法(ELISA)测定UVA照射皮肤成纤维细胞上清液中Ⅰ型、ⅡI型胶原； 3.用第5代成纤维细胞做实验对象，进行细胞分组，采用不同累积剂量UVA(30J/cm2、60J/cm2、90J/cm2)进行照射，半定量PCR检测线粒体DNA缺失情况；在培养液中分别加入不同剂量TGF-β1，即小剂量(0.1ng/ml)、中剂量(1.0 ng/ml)、大剂量(10.0 ng/ml)，用UVA60J/cm2照射，半定量PCR检测线粒体DNA缺失情况。 结果: 1.UVA照射体外培养的皮肤成纤维细胞导致TGF-β1、IGF-1、KGF分泌下降，IJVA 10 J/cm2、UVA 20 J/cm2照射组明显下降，与对照组比较，有显著性差异(P<0.01)。VEGF分泌升高，UVA 20 J/cm2照射组与对照组比较，有非常显著性差异(P<0.01)。 2.随着UVA照射剂量增加，成纤维细胞MTT的OD值下降，与对照组比较，UVA 10 J/cm2、UVA 20 J/cm2照射组OD值明显下降，有显著性差异(p<0.01)。细胞上清液中Ⅰ型、Ⅲ型胶原随着UVA照射剂量增加而减少。 3.TGF-β1干预光老化模型后，随着TGF-β1剂量增加，OD值升高，大、中剂量组OD值与UVA照射组比较，有非常显著性差异(P<0.01)，随着TGF-β1剂量增加，Ⅰ型、Ⅲ型胶原含量升高，呈剂量依赖关系。大剂量组、中剂量组与UVA照射组比较，有显著性差异(P<0.01，P<0.05)，大剂量组对UVA照射保护作用更明显，与UVA照射组比较，有显著性差异(P<0.01)，小剂量组处理后Ⅰ型、Ⅲ型胶原含量无显著性差异(P>0.05)。 4.培养皮肤成纤维细胞经UVA360nm照射，UVA累积剂量为UVA60J/cm2后发生mtDNA 4977 bp缺失，UVA90J/cm2时缺失明显(P<0.01)。TGF-β1干预后，大剂量组mtDNA 4977 bp缺失减轻，与UVA照射组比较，有非常显著性差异(P<0.01)，中、小剂量组与UVA照射组比较无显著性差异(P>0.05)。 结论: 1.UVA照射后体外培养的皮肤成纤维细胞分泌TGF-β1、IGF-1、KGF、下降；VEGF升高。 2.UVA照射体外培养的皮肤成纤维细胞，导致细胞衰老，增殖活性下降。Ⅰ型、Ⅲ型胶原合成减少，照射前加入TGF-β1，能部分逆转此趋势。 3.培养皮肤成纤维细胞经UVA360nm照射，UVA累积剂量为UVA60J/cm2后发生mtDNA4977 bp缺失，UVA90J/cm2时缺失明显。给予一定剂量的TGF-β1后，可以使皮肤成纤维细胞mtDNA4977 bp缺失减轻。因此通过调控TGF-β1可以作为今后抗光老化的新方法。