体外诱导脂肪干细胞向血管平滑肌细胞分化的实验研究-论文-万方医学网

体外诱导脂肪干细胞向血管平滑肌细胞分化的实验研究

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摘要目的：脂肪干细胞是否可以在特定的诱导环境下分化形成血管平滑肌细胞，为构建组织工程化血管的血管平滑肌细胞寻找新的种子细胞来源。方法：应用酶消化法消化人脂肪组织获取原代脂肪干细胞，待原代细胞生长至融合后，采用免疫磁珠法分选CD34+的细胞以取得较高纯化的脂肪干细胞，分选的细胞生长24小时后采用酶消化法收获细胞用于实验。实验分实验组和对照组两组，对照组培养液为5％M199培养液，实验组培养液为5％M199培养液内添加生长因子PDGF-BB(50ng/ml)、TGF-β1(2.5ng/ml)，诱导14天，每日观察诱导组细胞形态学的变化；14天后分别采用免疫荧光、RT-PCR的方法检测血管平滑肌细胞特异性标记α-SMA、Calponin、SM22 α、SM．MHC的表达情况；流式细胞术检测实验组细胞在诱导14天前后α—SMA、Calponin、SM-MHC的阳性表达率。结果：脂肪干细胞在特定的诱导环境下诱导14天后，细胞生长呈现血管平滑肌细胞所特有的峰-谷样生长；免疫荧光、RT-PCR检测细胞：α-SMA、Calponin、SM22 α、SM—MHC呈阳性表达；实验组细胞诱导14天后，α-SMA、Calponin、SM—MHC的阳性表达率为50.58±2.71％，42.94±2.76％，48.31±0.67％，诱导前为5.11±0.44％，5.73±0.54％，8.42±0.47％；诱导后较诱导前阳性表达率明显增加，有非常显著性差异(P<0.01)。结论：脂肪干细胞在体外特定的诱导环境中培养一段时间后，呈现明显的血管平滑肌细胞的特性，有可能成为构建组织工程化血管新的种子细胞来源。