摘要目的:慢性肢体缺血性疾病发病率逐年增高,治疗困难,尤其对于多节段动脉硬化性闭塞以及广泛小动脉闭塞者治疗相当棘手。治疗性血管新生(therapeutic angiogenesis)为该类疾病提供了新的治疗思路。血管内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)的发现和研究,使人们对血管新生有了新的认识:成年体内血管新生除了由已经存在的血管通过内皮细胞的分化,增生,移行,重塑生成新的毛细血管外,仍然存在由EPCs等前体细胞经动员、迁移、增殖及分化而形成毛细血管丛,再经血管重塑后形成成熟的血管网的过程。已证实成人骨髓内存在EPCs,在血管生长因子等作用下,EPCs能动员入外周血,增殖、分化为血管内皮细胞,促进缺血部位的血管新生。 本研究在建立大鼠肢体缺血模型基础上,探讨运动训炼(exercise training,ET)对外周血EPCs数量、缺血组织微血管密度(microvessel density,MVD)及血管生长因子表达的影响,证实运动训练能动员骨髓EPCs入外周血,提高血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的表达,促进缺血组织的血管新生。为临床治疗缺血性疾病提供理论依据。 方法:雄性Sorague-Dawley大鼠共60只,随机分为运动组(以下简称A组)、非运动组(以下简称B组)和假手术组(以下简称C组),每组各为20只。A组和B组分别采用结扎股总及股深动脉、切除大部分股浅动脉建立肢体缺血模型,C组仅作皮肤切开缝合。动物模型建立1周后A组大鼠放入运动训练器中跑30分钟(10转/分种),并以此运动量为准,每天一次,B、C组保持日常活动。动物模型经跑步训练一周后分别取A、B、C组大鼠各10只,心脏无菌采血3ml,分离采集外周血单个核细胞,细胞培养4d,对贴壁细胞进行免疫化学鉴定及细胞计数。运动训练4周后处死大鼠,取大鼠大腿内收肌组织块固定,免疫组织化学法检测缺血组织微血管密度(MVD)及血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的表达情况,采用SPSS统计软件进行数据分析。 结果: 1、体外培养的EPCs呈纺锤形,贴壁生长,CD133、VWF表达阳性。A组外周血培养的EPCs平均为14.18±2.60/HPF, B组为5.59±1.34/HPF,A组高于B组,二者有显著性差异(P<0.01)。 2、A、B两组缺血患肢组织新生毛细血管均增加,A组MVD:39.94±4.01/HPF, B组27.23±3.64/HPF,A组高于B组,二者有显著性差异(P<0.01); 3、缺血组织VEGF、bFGF表达均增强,A组(VEGF:3.3±0.67)、B组(2.3±0.67),A组高于B组,二者相比有显著性差异(P<0.01);bFGF:A组(3.1±0.73),B组2.4±0.84,A组高于B组,二者有显著性差异(P<0.01)。4、B组的外周血EPCs、组织MVD、VEGF、bFGF均明显高于C组(P<0.01),A、B、C三组之间存在显著性差异(P<0.01)。 结论: 1、肢体缺血因素能动员骨髓EPCs、提高组织VEGF、bFGF表达,促进缺血组织的新血管生成,改善局部供血,达到部分代偿作用。 2、运动训炼可以动员骨髓EPCs,定向迁移到缺血部位,增殖、分化为血管内皮细胞,并提高组织VEGF、bFGF表达,促进局部血管新生,改善缺血部位供血。
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