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摘要目的：香菇是名贵的食、药两用真菌之一，其具有调节免疫功能、抗病毒、抗肿瘤等功效。香菇C91-3是我课题组研究筛选得到的一株菌株，实验发现其菌丝体发酵液提取的粗蛋白LFP91-3不仅具有体内抑制肿瘤生长作用还具有显著的体外直接杀伤肿瘤细胞的作用。LFP91-3-A是我课题组从香菇C91-3中分离纯化得到的一种蛋白，前期的研究发现其可抑制H22细胞的增殖并可诱导H22细胞凋亡。本实验旨在观察LFP91-3-A是否可通过激活Caspase-3及抑制端粒酶的活性诱导H22细胞凋亡，探讨其可能的抗肿瘤作用机制；测定LFP91-3-A蛋白一级结构，以确定其是否为一未知新蛋白。 方法：将H22细胞分为2组：对照组、10ug/ml LFP91-3-A蛋白处理组。将2组细胞分别孵育0h、24h、48h、72h后采用Caspase-3分光光度法及TRAP-PCR银染法检测Caspase-3和端粒酶在2组H22细胞中的活性。经SDS-PAGE电泳LFP91-3-A蛋白，切割LFP91-3-A蛋白条带用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱-(MALDI-TOF-MS)测定LFP91-3-A蛋白肽质量指纹谱(PMF)通过在NCBI数据库中查询识别的方式对LFP91-3-A蛋白进行初步鉴定。用电喷雾四极杆飞行时间串联质谱(Q-TOF2)测定LFP9 1-3-A蛋白氨基酸排列顺序，NCBI数据库检索，对其进行进一步的鉴定。 结论：通过激活Caspase-3及抑制端粒酶的活性可能是LFP91-3-A蛋白诱导H22细胞凋亡的重要机制之一。Caspase-3活性的升高具有时间依赖性。经NCBI数据库检索LFP91-3-A蛋白两个酶切肽段测序结果Pro-Thr-Gln-Phe-Thr-Asn-Asn-Leu-Tyr-Ala-Arg(N端-C端)Ala-Pro-Gln-Gln-Val-Glu-Trp-Leu-Phe-Tyr-Lys-Lys(N端-C端)，证实其是一未知新蛋白。