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摘要本课题拟将Feridex标记体外培育的大鼠BMSCs，应用透射电镜观察标记后细胞的微观形态，应用Prussian blue染色检测Feridex标记效果和标记效率，MTT法检测标记后大鼠BMSCs增殖水平，探讨Feridex标记对大鼠BMSCs增殖水平的影响。通过联合诱导法诱导标记后细胞向肝细胞分化，应用RT-PCR技术检测诱导后细胞表达肝细胞ALB和AFP基因的水平，探讨Feridex标记对大鼠BMSCs向肝细胞分化能力的影响。 目的: 比较不同浓度Feridex标记大鼠BMSCs的标记效果以及标记后BMSCs增殖及向肝细胞分化能力，探讨Feridex标记大鼠BMSCs对其生物活性的影响，寻找不影响BMSCs增殖及向肝细胞分化能力的最适标记浓度，为下一步同种异体移植磁标记BMSCs的体内示踪研究实验提供理论依据。 材料与方法: 1、实验材料来源本实验所使用的BMSCs由5～6周龄SPF级雄性SD大鼠骨髓中提取(120～150g，购于中山大学试验动物中心)。主要试剂：Percoll单核细胞分离液、Feridex、MTT、亚铁氰化钾(K3Fe(CN)6)、总RNA提取试剂异硫氰酸胍(TrizOL)、RT-PCR试剂盒(FSK-100)等。主要设备：HERAEUS超净台、CO2恒温孵育箱、OlympusCK2型相差显微镜、H7500型透射电镜、SPECTRA-II型酶标仪、PCR扩增仪、电泳槽、电泳仪。 2、实验方法: 3、统计学分析：所有数据采用SPSS11.5软件进行统计分析。不同浓度组不同时间点BMSCs细胞增殖水平的比较用重复测量方差分析，若P<0.05组间差异有统计学意义时，各时间点不同浓度组BMSCs细胞增殖水平的比较用完全随机资料方差分析(One-way ANOVA)，若P<0.05组间差异有统计学意义时，则进一步行LSD多重比较。不同浓度组标记率的比较用R×C表的χ2检验，若组间差异有统计学意义时，则进一步选用四格表资料的χ2检验行两两比较。 结论: 1、Friedex标记浓度为5.6μg/ml，8.4μg/ml，11.2μg/ml，14μg/ml时，虽不影响BMSCs生物活性，但标记效率较低；Friedex标记浓度为19.6μg/ml，22.4μg/ml时标记效率较高，但可严重影响BMSCs生长，致其死亡。 2、当Friedex标记浓度为16.8μg/ml时，Feridex对BMSCs标记效率较高，并且不影响BMSCs存活、增殖及向肝细胞分化的能力，标记后的BMSCs可用于进一步实验。