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摘要背景和目的： Toll样受体(Toll like receptors.TLRs)可特异性识别多种病原成份，启动固有免疫反应，并进一步诱导适应性免疫应答。呼吸道感染及环境暴露因素对慢性阻塞性肺疾病(COPD)的发生、发展有重要影响。作为固有免疫的重要组成部分，TLRs是连接环境暴露与适应性免疫的重要桥梁，其在COPD发病机制中发挥的作用开始受到广泛关注。现有研究结果提示TLRs参与COPD的病理过程和免疫应答，但对TLRs在COPD患者体内实际表达情况和作用的研究很少。本课题在稳定期COPD患者中，以健康不吸烟者、肺功能J下常吸烟者、慢性持续期支气管哮喘(简称哮喘)为对照，探讨TLRs在COPD发生发展及炎症特点中的作用；应用A549肺上皮肿瘤细胞株，探讨Th1相关细胞因子及糖皮质激素治疗对呼吸道上皮TLRs表达的调节，从而进一步明确TLRs在COPD发病机制中发挥的作用。 研究对象、方法：临床研究部分入选健康不吸烟者25例，肺功能正常吸烟者21例，稳定期COPD患者30例，慢性持续期哮喘患者30例。其中稳定期COPD患者均为吸烟者。应用流式细胞仪全血免疫荧光直标法检测所有受试者外周静脉血CD14+单核细胞及中性粒细胞的TLR2、TLR4表达。所有受试者均检测肺功能，COPD患者查痰培养、血清C反应蛋白(CRP)，应用酶连免疫吸附法(ELISA)测定COPD和哮喘患者血清TNF-α、IL-8浓度。 实验室研究部分以A549人肺上皮肿瘤细胞株为实验对象，分别单独应用Th1相关细胞因子IFN-γ及TNF-α、地塞米松或联合应用地塞米松及上述细胞因子处理细胞，采用实时定量聚合酶链式反应(Real time PCR)法检测A549细胞TLR1、TLR2、TLR3、TLR4、TLR6表达的变化情况。 研究结果： 临床研究部分 1.CD14+单核细胞TLR2表达强度及阳性细胞率显著高于中性粒细胞(P<0.001)。CD14+单核细胞TLR2表达与TLR4表达成正相关(P<0.001)。CD14+单核细胞与中性粒细胞间TLR2、TLR4表达成正相关(P<0.05)。 2.COPD患者有24例留取合格痰标本，其中16例细菌负荷量超过105CFU/ml，以革兰氏阴性杆菌为主；CRP均处于正常水平。 3.健康不吸烟者、肺功能正常吸烟者及稳定期COPD患者3组比较： a.外周血CD14+单核细胞TLR2和TLR4的表达在肺功能正常吸烟者中明显下调(P<0.05)，在稳定期COPD患者中进一步显著下降(P<0.05)。 b.外周血中性粒细胞TLR2表达在肺功能正常吸烟者中明显下调(P<0.05)，在稳定期COPD患者中有进一步下降趋势(P>0.05)。中性粒细胞TLR4表达情况3组间无明显差异(P>0.05)。 c.CD14+单核细胞TLR2和TLR4的表达强度，中性粒细胞TLR2的表达强度与FEV1％预计值、FEV1/FVC比值成显著正相关(P<0.001)。 4.慢性持续期哮喘患者CD14+单核细胞中TLR2及TLR4阳性细胞率明显高于健康对照组(P<0.01)，中性粒细胞TLR2、TLR4的表达低于健康对照(P<0.01)。CD14+单核细胞TLR2和TLR4的表达强度与哮喘患者血清IgE浓度有相关的趋势。 5.COPD患者与哮喘患者的比较： a.COPD患者外周血中性粒细胞TUR2,TLR4表达明显高于哮喘患者(P<0.05)b.COPD患者CD14+单核细胞TLR2、 TLR4表达强度及阳性细胞率显著低于哮喘患者(P<0.001)。 c.COPD患者血清IL-8浓度水平显著高于哮喘患者，血清TNF-α浓度水平则低于哮喘患者(P<0.01)。 d.外周血中性粒细胞TLR2及TLR4表达强度与血清IL-8浓度成正相关(P<0.01)，单核细胞TLR2及TLR4阳性细胞率与血清TNF-β浓度成正相关(P<0.01)。 实验室研究部分1.IFN-γ使A549细胞TLR3表达明显上调，达对照组的3.78倍(P<0.05)。 2.TNF-α使A549细胞TLR2、TLR6出现轻度上调(P<0.05)，分别达到对照的1.62倍和1.22倍。 3.地塞米松使A549细胞TLR2、TLR4表达明显上调，分别达对照的3.27及3.43倍(P<0.05)。 4.地塞米松与IFN-γ共同作用A549细胞时，TLR2表达显著上调，达对照的6.25倍，地塞米松与TNF-α联合作用时TLR2表达增加至对照6.09倍(P<0.05)。 5.TNF-α与IFN-γ联合刺激A549细胞时，TLR2上调达对照的3.66倍，而地塞米松与TNF-α、IFN-γ三者共同作用A549细胞时，TLR2的表达出现十分显著的上调，达对照的29.81倍(P<0.05)。 结论： 1.健康人群单核细胞TLR2、TLR4表达显著高于中性粒细胞。 2.吸烟抑制单核细胞和中性粒细胞TLRs表达。 3.COPD患者单核细胞和中性粒细胞TLRs表达受到抑制，TLRs表达下调与病情进展有关。 4.COPD患者TLRs的表达状态与其炎症反应特点有关。 5.Th1细胞因子及糖皮质激素上调呼吸道上皮细胞TLRs表达，二者对呼吸道上皮细胞TLR2表达的上调具有协同作用，提示吸入激素治疗可能增强COPD患者气道上皮防御功能。