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摘要目的：人类免疫缺陷病毒(HIV)和丙型肝炎病毒(HCV)感染成全球分布，二者传播途径相同，混合感染率极高，且互相影响临床结局，但其机制尚不清楚。HIV Tat蛋白是HIV重要的调控蛋白，不仅能反式激活HIV的转录，还能促进许多病毒的复制和转录。本实验旨在构建HIV-1 Tat基因真核表达质粒，并研究Tat对HCV RNA复制和蛋白表达的影响，为探索HIV-1促进HCV致病性的分子机制奠定实验基础。 方法：以含HIV-1全长基因的质粒pNL4-3为模板，PCR扩增HIV-1 Tat基因第一外显子，应用基因工程技术将扩增的基因片段插入至真核表达质粒pcDNA3.1(+)，构建重组真核表达质粒pcDNA3.1-tat。限制性内切酶酶切分析及测序鉴定正确后，应用脂质体转染技术将重组质粒转染huh-7细胞,RT-PCR检测其基因转录情况，WesternBlot鉴定其是否能够表达相应的目的蛋白质。应用脂质体转染技术与HCV复制子质粒共转染huh-7细胞。48小时后，提取细胞总RNA，RT-PCR检测HCV RNA正链5'端非编码区序列(UTR)并进行半定量分析。提取细胞总蛋白，Western blot分析HCV核心蛋白表达水平。 结果：成功扩增了Tat基因，酶切和测序结果表明重组真核表达质粒pcDNA3.1-tat构建正确，RT-PCR和Western blot方法证实该质粒能在huh-7细胞中有效表达HIV-1 Tat蛋白质。RT-PCR扩增HCVRNA正链5'UTR的产物经琼脂糖凝胶电泳后摄像并运用图像分析软件进行灰度值分析，经t检验，实验组和对照组具有显著性差异(t=15.07)。Western blot检测HCV核心蛋白结果显示实验组HCV RNA核心蛋白表达水平高于对照组。 结论：成功构建了HIV-1 Tat基因的真核表达质粒载体，并在huh-7中表达；HIV-1 Tat蛋白能促进HCV RNA的复制和蛋白表达。实验结果为进一步探索HIV促进HCV致病性的分子机制奠定了基础，同时也为HIV阳性的HCV感染者的疾病预防和治疗提供了新的实验依据。