小鼠精子获能过程中酪氨酸磷酸化蛋白质的研究-论文-万方医学网

小鼠精子获能过程中酪氨酸磷酸化蛋白质的研究

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摘要蛋白质的酪氨酸磷酸化程度增强是精子获能后重要的标志之一，研究发现酪氨酸磷酸化蛋白通过多种信号通路参与精子获能，并且影响到精子获能后一些生理变化如：超激活运动、顶体反应等。目的：本课题旨在分离小鼠精子获能中酪氨酸磷酸化增强的蛋白质，并对其进行质谱鉴定，为后续的功能研究奠定基础。方法：小鼠精子体外培养获能后，用Western blot法确定酪氨酸磷酸化的蛋白质，然后用二维凝胶电泳技术分离蛋白质，ImageMaster软件分析后将目的蛋白挖点进行MALDI-TOF质谱分析。结果：(1)小鼠精子获能后添加A23187诱导顶体反应，发现顶体反应率明显升高，证明精子获能成功；(2)检测发现精子获能以后分子量为42，56、66，82和95 kDa的蛋白质酪氨酸磷酸化增强；(3)分别得到精子蛋白质银染和考马斯亮蓝染色的图谱，质谱分析后得到八个酪氨酸磷酸化蛋白质的肽质量指纹图。结论：MALDI-TOF质谱鉴定八个酪氨酸磷酸化蛋白质。其中两个为未知蛋白，另外六个蛋白质中，乌头酸酶、甘油-3-磷酸脱氢酶、tektin 2是我们在精子获能过程中新发现的酪氨酸磷酸化蛋白质。