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双价抗真菌融合基因植物表达载体构建及转基因烟草的初步检测

摘要真菌性病害和杂草危害是造成农作物产量大幅度下降及品质变劣的主要原因,严重影响着农业生产。在植物抗病基因工程中,通过将抗真菌蛋白基因和抗除草剂基因导入植物的方法来提高植物对真菌病害和除草剂的抵抗能力已成为一种直接而有效的途径。随着越来越多的抗真菌蛋白被发现,人们试图采用多基因共表达的策略将多种抗真菌蛋白基因转入植物,利用其协同作用以提高植物的抗病能力。但由于受到可选择的载体数目和载体容量的限制,这个目的很难较好的实现。融合基因技术和多价载体的构建是近几年出现的用于解决这一难题的有效途径。本研究通过木霉几丁质酶基因(CHI)和β-1-3-葡聚糖酶基因(GLU)的融合并将其连接到改造好的含有Bar基因的植物表达载体pBI121-Bar上构建双价植物表达载体pBI121-Bar/Chi-Glu,旨在提高作物抗真菌性病害的能力,同时降低在农业生产中除草所花费的大量人力和财力。主要结果如下: 1.利用木霉几丁质酶基因(CHI)和β-1,3-葡聚糖酶基因(GLU)构建了融合基因。 2.将Bar基因插入植物表达载体pBI121中,获得含有抗除草剂Bar基因的植物表达载体pBI121-Bar。 3.构建了含有融合基因的植物表达载体pBI121-Bar/Chi-Glu,同时构建了两个单价(CHI和GLU)植物表达载体pBI121-Bar/Chi和pBI121-Bar/Glu。 4.以烟草无菌苗叶片为受体,用农杆菌介导法将pBI121-Bar/Chi-Glu转入烟草中,以Bar基因作为选择标记,草丁膦(phosphinothricin,PPT)为选择剂进行筛选,获得了转基因植株。

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