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落新妇甙抗移植排斥的作用和机理的实验研究

摘要目的:探讨一种从我国传统中药植物土茯苓中提取的单体-落新妇甙抗移植排斥作用的效果和作用的细胞与分子机制,为其作为可选的抗器官移植排斥的一种新的免疫抑制药物提供临床研究前的实验数据。 方法:采用血管化的小鼠颈部同种心脏移植模型,根据术后落新妇甙单独使用及与低剂量环孢素联合使用的不同用药情况各分为对照组、低剂量、中剂量,高剂量组,观察术后各组小鼠存活时间;分析落新妇甙对骨髓培养的DC分化、发育的影响以及对LPS刺激后CD11c、CD80、CD40表型的变化;研究落新妇甙处理的DC与MF2.2D9细胞共孵育后IL-2的表达水平及同种MLR反应的影响;采用3H-TdR掺入法检测落新妇甙对淋巴细胞丝裂原介导的增殖、T细胞同种MLR反应的作用以及落新妇甙作用的T细胞内p38和NF-κB表达的变化;并探讨体内注射落新妇甙一周后,对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能、B淋巴细胞抗体形成能力的作用。 结果:落新妇甙高剂量组同种异体心脏移植物的存活期显著延长(P<0.01),但存活期少于30天;但与低剂量CsA(5mg/kg体重)联合使用后,可100%延长心脏移植物存活60天以上(n=10),结果提示落新妇甙单独使用效果不如临床一线免疫抑制剂CsA等,但与低剂量的CsA联合使用后,可非常显著提高移植物的存活期,有效减少CsA使用剂量,降低毒副作用;免疫学机制研究发现,落新妇甙可抑制LPS等炎症因子对DC的促成熟作用,有效抑制DC的抗原递呈能力及DC介导的同种MLR反应,并通过抑制T细胞的p38和NF-κB表达明显抑制淋巴细胞的增殖和T细胞的同种MLR反应;体内实验显示落新妇甙可抑制巨噬细胞的吞噬能力以及B细胞的抗体形成。 结论:落新妇甙具有抗同种移植排斥作用,可以有效联合低剂量CsA等免疫抑制剂以增强其疗效、减少CsA的使用剂量,降低毒副作用。其机制可能为落新妇甙抑制DC的分化发育、抑制LPS等炎症因子对DC的促成熟作用,并通过抑制DC的抗原递呈能力、DC介导的同种MLR反应发挥作用;另一方面,落新妇甙通过抑制T细胞的p38和NF-κB表达明显抑制淋巴细胞的增殖和T细胞的同种MLR反应,从而发挥抗移植排斥反应的作用。

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