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摘要红树林是热带海岸潮间带的木本植物群落,其生境具有不同于海洋和陆地的性质,地下生态系统较之其他环境有很大的不同,蕴藏着巨大的微生物资源。生存于红树林土壤的放线菌,其次级代谢产物在结构类型以及生物活性方面都呈现出与陆生放线菌不同的特点和多样性,作为生物活性物质来源也越来越受到重视。红树林枯枝落叶中含有大量的纤维素和木质素,因此,有关真菌纤维素和木质素分解酶的研究较多,但对放线菌产生的降解酶类的研究相对较少。 本文从漳州红树林自然保护区的七个土壤样品中,选用五种选择性分离放线菌的培养基,共分离得到放线菌286株,但分离的放线菌中90％为链霉菌属的菌株。通过16SrDNA序列的同源性比较发现了其中有三株潜在的链霉菌属的新种,运用现代多相分类鉴定研究方法,对潜在新种进行了形态学,生理生化特征,化学分类特征及分子分类的鉴定,确定了三株链霉菌的分类地位,并将其中一株链霉菌MGR035命名为厦门链霉菌(Streptomyces xiamenensis sp.nov.)作为链霉菌属的新种进行了描述。 通过采用含有纤维素、半纤维素的筛选平板对分离得到的152株放线菌进行了产酶菌株的初筛,发现有50％的菌株对纤维素、半纤维素有不同程度的降解能力,有9株链霉菌的酶活性较高。对其中三株菌株的酶活特性进行了初步测定,发现所产的纤维素、半纤维素酶均属中温、中性酶,酶反应最适温度在50-60℃、最适pH值为6-7。本实验设计了两对兼并引物,PCR扩增获得了两株高产酶链霉菌的半纤维素酶核心区序列,利用反向PCR技术克隆得到了菌株Streptomyces sp.zxy19和Streptomyces sp.s6-204的230个氨基酸的木聚糖酶和530个氨基酸的甘露聚糖酶基因,分别与糖基水解酶家族11和5的成员具有约80％的氨基酸序列同源性。随后构建了酶基因在大肠杆菌中的原核表达载体,实现了重组酶基因的可溶性表达,并进行了酶活性的检测。初步实验发现克隆的甘露聚糖酶基因氨基酸序列与同一酶家族的其它酶基因氨基酸序列相比,其开放阅读框N端多出100个氨基酸,且对于酶活性是必须的,其酶蛋白的结构特征将在以后的工作中做进一步的实验研究。