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摘要本研究分为五部分： 第一部分：制定人外周血和蜕膜CD4+CD25+调节性T细胞体外培养最佳方案 目的：制定人类外周血和蜕膜CD4+CD25+调节性T细胞(RegulatoryTcell，Treg)在体外的最佳培养方案。 材料与方法：抽提正常早孕妇女外周血和蜕膜组织中CD4+CD25+T细胞，采用不同组合的CD3单抗/CD28单抗/IL-2联合刺激方案进行培养后，观察细胞增殖情况。 结果：不同的刺激条件下人类外周血和蜕膜CD4+CD25+T细胞的增殖情况不一样，其中在包被CD3单抗(10ug/ml)/游离CD28单抗(2ug/ml)/IL-2(100u/ml)的联合作用下，细胞增殖反应最大，达2-4倍，其他组合的联合刺激下CD4+CD25+T细胞增殖反应不明显。 结论：在适合的刺激条件下，早孕妇女外周血和蜕膜的CD4+CD25+T细胞在体外最多可增殖2-4倍。 第二部分：CD4+CD25调节性+T细胞对原因不明复发性流产患者外周血和蜕膜CD8+T、CD4+CD25T细胞调亡能力的影响 目的：探讨原因不明复发性流产(unexplainedrecurrentspontaneousabortion，URSA)患者外周血和蜕膜中CD4+CD25+Treg细胞对CD4+CD25-T细胞、CD8+T细胞的细胞凋亡的影响。 材料与方法：抽提URSA组和正常对照(normalpregnancy，NP)组妇女外周血和蜕膜组织中CD4+CD25+T细胞分别与CD4+CD25-T细胞和CD8+T细胞进行共培养，采用三色荧光标记流式细胞术检测共培养后CD4+CD25-T细胞和CD8+T细胞表面CD95L的表达频率。 结果： (1)NP组中外周血和蜕膜CD4+CD25-T细胞、CD8+T细胞与CD4+CD25+T细胞共培养后，CD4+CD25-T细胞、CD8+T细胞表面CD95L表达频率显著上升(P＜0.01)； (2)URSA组中外周血和蜕膜CD4+CD25-T细胞、CD8+T细胞与CD4+CD25+T细胞共培养后，CD4+CD25-T细胞、CD8+T细胞表面CD95L表达频率无显著变化(P＞0.05)； (3)NP组中外周血和蜕膜CD4+CD25-T细胞、CD8+T细胞与URSA组CD4+CD25+T细胞共培养后，CD4+CD25-T细胞、CD8+T细胞表面CD95L表达频率无显著变化(P＞0.05)； 结论：URSA患者外周血和蜕膜中CD4+CD25+Treg细胞的抑制功能受损，表现在对CD4+CD25-T细胞、CD8+T细胞的凋亡影响失常。 第三部分：CD4+CD25+调节性T细胞对原因不明复发性流产患者外周血和蜕膜Th1/Th2、3型细胞因子表达的影响 目的：探讨CD4+CD25+Treg细胞对URSA患者中CD4+CD25-T细胞、CD8+T细胞分泌Th1/Th2、3型细胞因子的影响。 材料与方法：抽提URSA组和NP组妇女外周血和蜕膜组织中CD4+CD25+T细胞分别与CD4+CD25-T细胞和CD8+T细胞进行共培养，采用ELISA方法检测共培养后上清液中细胞因子IL-10、TGF-β1、IFN-γ的表达水平。 结果： (1)外周血两组CD4+CD25-T细胞与CD4+CD25+T细胞共培养的后，其分泌的IFN-γ水平显著下降(P＜0.05)；蜕膜中仅URSA组CD4+CD25-T细胞与CD4+CD25+T细胞共培养后，其分泌的TGF-β1显著增加(P＜0.05)； (2)外周血两组CD8+T细胞与CD4+CD25+T细胞共培养后，其分泌的IFN-γ、TGF-β1水平均显著下降(P＜0.01)；蜕膜中仅NP组CD8+T细胞与CD4+CD25+T细胞共培养后，分泌的TGF-β1显著下降(P＜0.01)； (3)外周血NP组CD4+CD25-T细胞与NP组CD4+CD25+T细胞后，其分泌的IL-10水平显著升高(P＜0.05)；蜕膜中NP组CD4+CD25-T细胞与URSA组CD4+CD25+T细胞共培养后，其分泌的IL-10水平显著下降(P＜0.01)； (4)外周血NP组CD8+T细胞与NP组CD4+CD25+T细胞共培养后，其分泌的IFN-γ水平显著下降(P＜0.05)：外周血NP组CD8+T细胞与URSA组CD4+CD25+T细胞共培养后，其分泌的IL-10水平显著降低(P＜0.05)：蜕膜NP组CD8+T细胞分别与两组CD4+CD25+T细胞共培养后，其分泌的TGF-β1水平均显著升高(P＜0.05) 结论：URSA患者中CD4+CD25+Treg细胞的抑制功能受损，可能对CD4+CD25-T细胞、CD8+T细胞分泌Th1/Th2、3型细胞因子表达有一定影响。 第四部分：TGF-β1诱导CD4+CD25+调节性T细胞表达的研究 目的：探讨在正常早孕妇女中，TGF-β1诱导外周血和蜕膜的CD4+CD25-T细胞转变成CD4+CD25+Treg细胞的作用。 材料和方法：抽提正常早孕妇女外周血和蜕膜组织中CD4+CD25-T细胞，用TGF-β1刺激后，采用三色免疫荧光染色法分别检测第0、3、6天外周血和蜕膜TGF-β1诱导生成的CD4+CD25+FoxP3+T细胞的表达频率。 结果：加入不同浓度的TGF-β1，均可诱导CD4+CD25-T细胞中FoxP3的表达频率增加，从而转化成CD4+CD25+Treg细胞；其中以加入TGF-β1终浓度5ng/ml时FoxP3的表达频率最高。 结论：TGF-β1通过诱导FoxP3的表达，使外周血和蜕膜的CD4+CD25-T细胞转变成CD4+CD25+Treg细胞。 第五部分：原因不明复发性流产患者母胎界面CD4+CD25+T和CD8+CD28-调节性T细胞表达频率的研究 目的：探讨原因不明复发性流产患者蜕膜CD4+CD25+T和CD8+CD28-调节性T细胞表达频率。 方法：采用流式细胞四色免疫荧光法，对17例URSA组和20例NP组妇女的蜕膜CD4+CD25+FoxP3+T细胞、CD8+CD28-T细胞的表达频率进行检测。 结果：URSA组蜕膜CD4+CD25+FoxP3+T细胞表达频率明显低于NP组(10.17±5.80％vs.27.06±13.42％，P＜0.0001)。URSA组和NP组蜕膜CD8+CD28-T细胞表达频率无明显差异(30.56±9.52％vs.23.57±7.36，P＞0.05)； 结论：蜕膜CD4+CD25+FoxP3+调节性T细胞明显减少，是导致URSA患者母胎界面免疫耐受异常的重要原因。