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摘要微孔扩散盒构建内置生物人工肝治疗大鼠急性肝衰的实验研究内置型生物人工肝类似于一种特殊的肝细胞移植，即将肝脏细胞注入特殊材料构成的细胞载体，然后移植入受体发挥支持肝脏功能的作用。它不仅能给置入的细胞提供支持界面，使细胞存活时间更长；还能够提供免疫屏障功能，防止细胞被机体免疫系统破坏。本实验应用微孔扩散盒和大鼠肝脏细胞构建内置生物人工肝，并研究微孔扩散盒内的最适细胞密度，内置生物人工肝在体外的功能及对急性肝衰大鼠的治疗作用。 第一部分：微孔扩散盒内最适注入细胞密度的研究 [目的]以微孔扩散盒为细胞载体构建内置型生物人工肝，探索最适宜的细胞密度。[方法]用改良的两步胶原酶灌注法分离大鼠肝细胞，按照不同细胞密度，注入微孔扩散盒，体外培养3天后，检测细胞活率、安定代谢功能、尿素及白蛋白合成功能。[结果]微孔扩散盒内细胞的活率随着细胞密度的增加而下降(P＜0．05)，B组(5×106/ml)与C组(1×107/ml)无明显差异(P＞0．05)；细胞密度小于1×107/ml时，代谢及合成功能随细胞密度增加而增强，而1 ×108/ml组功能有所下降，代谢合成功能在1 × 107/ml组相对最强(P＜0．05)。[结论]以微孔扩散盒为细胞载体的的简易内置生物人工肝的最适细胞密度为1×107/ml。 第二部分：微孔扩散盒构建的内置生物人工肝的体外功能研究 [目的]探讨体外微孔扩散盒对培养大鼠肝脏细胞活率及功能影响，并了解构建的内置生物人工肝的肝脏支持功能。[方法]设置微孔扩散盒组(每5颗约含有1×107肝细胞，培养于-25ml培养瓶内)，相同数量的裸肝细胞为对照组(培养在以FN预处理的25ml培养瓶内)，连续检测7天的细胞活率，ALT、LDH的释放量，安定代谢功能，尿素及白蛋白合成功能。[结果]培养7天时间内，两组细胞活率均维持在80％以上，组间无差异。两组的ALT及LDH释放量均呈逐渐降低趋势，组间无显著差异；两组安定转化功能均呈下降趋势，组间比较无差异(P＞0.05)，微孔扩散盒组的蛋白合成功能与裸细胞组类似，但尿素功能低于裸细胞组(P＜0．05)。．[结论]体外微孔扩散盒对培养大鼠肝脏细胞的尿素合成功能有一定影响；由大鼠肝脏细胞和微孔扩散盒构建的内置生物人工肝在体外具有一定的解毒和合成功能。 第三部分：微孔扩散盒构建的内置生物人工肝治疗大鼠急性肝衰的实验研究 [目的]建立大鼠急性肝功能衰竭模型，探讨以微孔扩散盒为细胞载体构建的内置生物人工肝在体内的肝功能支持作用。[方法]用90％肝叶切除的方法建立大鼠急性肝功能衰竭模型60例，随机分为三组，将构建的内置生物人工肝(约含1×107肝细胞)植入动物模型腹腔进行肝功能支持治疗。以腹腔移植相同数量的裸肝细胞为对照组，并设未治疗组。检测各组大鼠24h，72h后的血氨，凝血酶原时间，部分肝功能指标，统计大鼠模型的生存率、生存时间；并分别于一周，二周时取出微孔扩散盒内的细胞检测活率。[结果]24小时后各组生化检测，与未治疗组相比较，肝细胞移植组和内置生物人工肝组的ALT、TB、血氨明显降低(P＜0.01)，但两组间比较无明显差异(P＞0．05)；72小时后各组生化检测，内置生物人工肝组的ALB、PT与肝细胞移植组比较显著降低(P＜0.05)，ALT、TB、BG、血氨无差异(P＞0．05)。内置生物人工肝组可以延长大鼠的存活时间，但生存率改善没有显著差异(P＞0．05)；微孔扩散盒内的肝脏细胞移植两周后的活率仍有50％以上。[结论]在体内，微孔扩散盒能够提高肝脏细胞的活率，构建的简易内置生物人工肝对急性肝衰大鼠有一定的治疗作用，可改善肝衰大鼠模型的部分生化指标并且优于裸肝细胞移植，但尚不能改善急性肝衰大鼠的生存率。