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摘要近10余年米，小肠移植已从实验阶段发展成为对于那些冈肠外营养导致发生危及生命并发症的短肠综合征患者治疗的选择。新的免疫抑制药物使临床上小肠移植患者的生存率可与其他其它脏器移植相比，其一年生存率接近70％。 在1995年登记的小肠移植患者中，仅有65人存活并具有小肠功能：而到了2004年，数目达到443人。但5年的生存率仍然只有43％。慢性排斥导敛小肠无功能仍然是难点。血管闭塞性硬化样改变是慢排标准特征之一。慢性排斥可导致血管管腔狭窄、局部缺血、纤维化和最终的器官功能衰竭。慢性排斥典型的病理改变表现为内膜增厚、血管平滑肌增厚、间质纤维化以及炎性细胞浸润。许多淋巴细胞和单核细胞衍生的细胞因子参与了这样的血管病变。 鱼油富含n-3多不饱和脂肪酸，被认为具有免疫调节作用。N-3多不饱和脂肪酸可降低服用鱼油心脏病患者的血管硬化。鱼油也可以延长动物心脏移植中移植物生存时间。本实验的目的建立大鼠小肠移植慢性排斥的模型，并观察给予鱼油是否能改善移植肠慢性排斥的血管硬化。 第一部分 建立F344-Lewis全小肠异位移植模型 小肠移植作为治疗短肠综合征的唯一根本治疗方法被越来越广泛地开展，但例数远少于其它大器官移植，而且长期效果不佳，所以建立动物模型进行实验研究非常重要。大鼠操作容易、对感染有相对的抵抗力和具有免疫学纯化的种系(这是能实施免疫学研究的重要因素)，故大鼠小肠移植是研究移植免疫反应的理想模型。目前小肠移植实验研究按消化道重建方式分为原位和异位移植两种手术方式。异位移植对于免疫学研究是一个好的选择，手术柏对简单死亡率低。而原位移植与临床接近，对于生理学研究是较好的选择。 我们采用F344至Lewis大鼠的仝小肠移植，供体门静脉分支向肝方向只须分离结扎脾静脉，在脾静脉结扎上方离断门静脉，无需分离结扎胄左静脉和分离到肝门部。采用端侧血管吻合，分别行肠系膜上动脉与腹主动脉、门静脉与下腔静脉连续吻合，先吻合动脉，冉吻合静脉。结扎近端空肠，末端小肠左下腹拖出造口。 本部分预实验21对，整个手术时间 135±12min，其中动脉吻合时间17±3min，静脉吻合时间10±2 min，冷缺血时间35±4min，热缺血时间27±5min。5灭存活率90.5％(19/21)。 大鼠小肠移植手术成功的关键是术后复温、活力佳的移植肠、良好的血管吻合和充分液体补充。 第二部分 低剂量环孢素诱导小肠移植物慢性排斥 最早Moncllik和Russell使川近交系大鼠和它们的F1杂交后代建立排斥或移植物抗宿主疾病的模型。低排斥反应种系组合中使用低剂量的免疫制剂即可获得移植物的长期存活，例如BN到LEW。近年来出现了新的趋势，即采用完全同种异体的模型作为更代表临床的典型情况，例如F344至Lewis。F344和Lewis之间的差别在RT1．C区域，也就是大鼠MHC的E/C位点，以及非MHC区域(RT6位点)。我们采用F344至Lewis大鼠的全小肠移植，术后0-13天肌注环孢素(5mg/kg/d)。术后60天和90天取末端回肠2 cm用10％福尔马林固定或是放入液氮中保存。常规H&E、Masson染色和内弹力膜染色，双盲评分(0-3分)评估绒毛钝化、上皮细胞凋亡小体、肌层和系膜纤维化；0-5分评价小肠血管硬化评分。免疫组化评价移植物中CD4、CD8、CD68和CD45R细胞浸润的数目。ELISA方法分析移植肠中IL—6、TNF—α和IL-10的表达。 结果表明小肠慢性排斥的主要病理特征为：绒毛钝化、间质纤维化、炎性细胞浸润和闭塞性血管病变。CD4、CD8和巨噬细胞是主要的细胞浸润。持续的细胞因子的表达，如IL—6，TNF—α和IL-10，参与了慢性排斥的发展。在早期(术后60天)，炎性事件较活跃；而后期(术后90天)炎症减弱，农现为动脉闭塞和纤维化事件。这表明移植物中慢性排斥是一较惰性的发展过程。短期使用低剂量环孢素，我们成功的建立了F344到Lewis的全小肠异位移植的慢排模型。 第三部分 N-3不饱和脂肪酸改善小肠移植慢性排斥的血管病变 仍然采用F344至Lewis大鼠的全小肠移植模型，术后0-13天肌注环孢素(5mg/kg/d)。术前两周至术后60天，每天按照0.6％和0.3％V/W(ml/每100g体重)鱼油灌胃。术后60天取末端回肠2 cm用10％福尔马林固定或是放入液氮中保存。病理切片H&E和Masson染色，0-3分评价绒毛钝化、上皮细胞凋亡小体、肌层和系膜纤维化；内弹力膜染色0-5分评估小肠血管硬化。计算连续10个400倍视野的阳性细胞平均值：CD4、CD8、CD68和CD45R。ELISA方法分析移植肠中IL—6、TNF—α和IL-10的表达。采用凝胶迁移实验测定移植肠中NF kappa—B的活性。结果表明：0.6％V/W鱼油灌胃可以抑制移植肠中NF kappa—B的活性，并可以显著降低移植小肠中TNF—α和IL—6的表达。除此之外0.6％鱼油灌胄还可以增加移植肠中IL-10。这些对于改善移植物血管硬化有益。0.3％V/W鱼油灌胃虽然有改善血管硬化的趋势，但无显著差异。 这是首次报道n-3多不饱和脂肪酸可以改善小肠移植的血管硬化。