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摘要目的:研究胺甲斑蝥素(4—Amino-2-Methyl—Cantharidinimide，AMC)的抗惊厥作用、中枢神经系统(CNS)毒性作用及其体存药效动力学。观察AMC对青霉素慢性点燃耐苯妥英钠大鼠模型的对抗作用及对耐药大鼠脑内mdr1mRNA和P—糖蛋白(Pgp)表达的影响，从基因和蛋白水平探讨AMC抗耐药作用机制。 方法:(1)采用最大电休克惊厥模型，以卡马西平、托吡酯为阳性对照，分析灌胃(ig)小鼠不同剂量AMC的量效和时效关系，按Bliss法计算抗MES的ED50，比较其效价强度和效能；采用戊四唑惊厥模型比较各药的惊厥潜伏期、抗惊厥率；采用转轮法，分析灌胃(ig)小鼠各药后的CNS毒性作用，按Bliss法计算TD50，比较各药的毒性大小；(2)采用药效法，运用数学模式及参数来模拟各药在体内的药效动力学过程；(3)采用青霉素(PNC，3×106U·kg-1，ip)连续点燃13天的方法建立大鼠惊厥模型。灌胃惊厥大鼠苯妥英钠(PHT，0.225g·kg—1·d)21天，建立耐药模型。以惊厥潜伏期和Racine行为学分级作为评定药效指标。采用逆转录聚合酶链反应(RT—PCR)技术，检测AMC(0.175g·kg-1、0.0875g·kg-1，ig)、氟桂利嗪(FLU，0.0875g·kg-1，ig，阳性对照)对耐药惊厥大鼠脑内Pgp基因mdr1的表达变化，采用免疫组化(SABC法)技术，检测脑内Pgp的表达变化。 结果:(1)AMC、卡马西平、托吡酯对MES模型均有对抗作用，量效呈正相关性，各药抗惊率分别为：AMC100％，托吡酯90％，卡马西平100％；ED50分别为AMC(0．022g·kg-1)，托吡酯(0.22g·kg-1)，卡马西平(0.016g·kg-1)；(2)AMC、卡马西平、托吡酯可对抗MET发作，MET惊厥潜伏期数值依次为：AMC(9.70±3.16min)，托吡酯(9.57±4.47min)，卡马西平(9.51±2.52min)；(3)AMC、卡马西平、托吡酯均有CNS毒性作用，其TD50值依次为：AMC(0.545g·kg-1)、TPM(0.492g·kg-1)、CBZ(0.141g·kg-1)；(4)体存药效动力学研究结果表明，各药的最小起效剂量由低到高为：AMC(0.0032g·kg-1)、卡马西平、托吡酯；达峰时间由快到慢为：AMC(0.2h)、卡马西平、托吡酯；半效期由长到短为：AMC(3.0h)、卡马西平、托吡酯；药效作用持续时间由长到短为：AMC(15.6h)、托吡酯、卡马西平；消除速率常数AMC(0.2)小于其它两药；(5)大鼠经小剂量青霉素(PNC，3×106U·kg-1)筛选后出现RacineⅣ—Ⅴ级发作，确定点燃成功；惊厥大鼠灌胃苯妥英钠0.225g·kg—1·d，每日1次持续3周。耐苯妥英钠组大鼠的惊厥潜伏期(20.62±9.80min)与惊厥模型对照组(19.27±10.55min)相比较差别无统计学意义(P＞0.05)，且均出现RacineⅣ—Ⅴ级发作，提示耐苯妥英钠惊厥模型制备成功，模型成功率达100％；(6)灌胃两种剂量AMC和FLU能使耐药大鼠痫性行为较耐药惊厥模型对照组减轻(P＜0.01)，惊厥潜伏期延长(P＜0.01)；(7)正常对照组mdr1mRNA表达量(0.83±0.09)，惊厥模型组mdr1mRNA表达量较正常对照组增加，差异有统计学意义(P＜0.05)；耐苯妥英钠惊厥模型组mdr1mRNA表达量较惊厥模型组继续增高，且统计学上具有显著性差异(P＜0.01)；分别灌胃两种剂量AMC及FLU后，mdr1mRNA表达量降低，与耐药模型组相比均有显著性统计学差异(P＜0.01)；AMC小剂量组mdr1mRNA表达量较大剂量组多，但两剂量组mdr1mRNA表达均比FLU组少；(8)正常对照组Pgp表达量(1.83±1.72)，模型对照组Pgp表达量比正常对照组增高，有显著性统计学差异(P＜0.01)；耐苯妥英钠惊厥模型组大鼠的Pgp表达量较惊厥模型组明显增高，有显著性统计学差异(P＜0.01)；AMC大、小剂量组以及FLU阳性对照组Pgp水平均较耐药模型组降低，统计学上均有显著性差异(P＜0.01)；但FLU组Pgp表达量比AMC大、小剂量组多。各组Pgp表达变化趋势与RT—PCR测定的mdr1mRNA表达变化结果一致。 结论:(1)AMC能够对抗MES发作，抗惊厥最大效能比托吡酯强而与卡马西平相似，效价强度较托吡酯大而与卡马西平相似；(2)AMC、卡马西平、托吡酯均可对抗MET发作，AMC抗MET发作的最大效能与托吡酯、卡马西平相似；(3)AMC、卡马西平、托吡酯均有CNS毒性，其中AMC毒性最小；(4)AMC与卡马西平和托吡酯相比，最小起效剂量最低、达峰时间最快、半效期和作用持续时间最长、消除较慢。(5)小剂量青霉素点燃13天，可建立惊厥模型，灌胃苯妥英钠21天，惊厥大鼠对苯妥英钠产生耐受，耐药惊厥模型造模成功；(6)灌胃两种剂量AMC和FLU能使耐药大鼠痫性行为减轻，惊厥潜伏期延长，对耐苯妥英钠惊厥大鼠惊厥发作有对抗作用；(7)正常大鼠脑内的mdr1mRNA和Pgp仅有微量表达，PNC可诱导mdr1mRNA和Pgp的表达；灌胃苯妥英钠21天，两者表达进一步显著增高。两种剂量AMC和FLU能抑制耐药惊厥大鼠脑内mdr1mRNA表达，降低耐药惊厥大鼠脑内Pgp的含量，说明AMC及FLU的抗耐药机制与其抑制耐药惊厥大鼠脑内mdr1mRNA基因表达产物Pgp有关。(8)AMC和FLU抑制Pgp表达变化趋势与RT—PCR测定的mdr1mRNA表达变化结果一致，说明两药抑制Pgp表达的直接原因是通过抑制mdr1mRNA表达实现的，AMC作用性质与FLU相似，但AMC的抗耐药作用较FLU强。