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摘要第一部分： 目的：探讨慢性葡萄糖毒性对α细胞胰高糖素分泌的影响及α细胞胰岛素抵抗对其影响。 方法：胰岛细胞和TCl—6细胞(α细胞株)分别培养于含低浓度(5.5mM)、中浓度(11.1mM)和高浓度(25mM)葡萄糖的培养基中1，3，5d，分别检测胰高糖素(Glc)分泌及其mRNA表达；加入不同浓度胰岛素6h后，观察对培养5d的原代胰岛和TCl—6细胞Glc分泌和基因表达的影响并用Western Blot方法检测高糖对α细胞Akt磷酸化的影响。 结果： (1)培养1d时，低、中和高浓度葡萄糖培养的原代胰岛细胞和TCl—6细胞Glc分泌没有显著差别，培养3d时，高糖培养的胰岛细胞胰高糖素分泌明显增加42％[(2252.64±41.71)pg/mg protein vs(3205.97±45.53)pg/mgprotein，P<0.05)]，而TCl—6细胞胰高糖素的分泌无明显变化，试验第5d，中浓度和高糖培养的原代胰岛细胞胰高糖素均较低糖培养明显升高，分别增加52％((2452.22±67.89)pg/mg protein vs(3735.44±54.89)pg/mg protein，P<0.05)和117％[(2452.22±67.89)pg/mg protein vs(5320.20±398.51)pg/mg protein，P<0.05)]，而TCl—6细胞仅在高糖培养5d时胰高糖素分泌较低糖培养明显增加，为74％((78.62±4.72)ng/106 protein vs(136.8±10.94)ng/106 protein，P<0.05)。 (2)与低糖培养1d相比，中、高浓度葡萄糖培养1d的原代胰岛细胞和TCl—6细胞Glc基因表达没有明显差别，但培养3d后，高糖培养的胰岛细胞胰高糖素基因表达较低糖培养升高125％(P<0.05)，而TCl—6细胞胰高糖素基因表达此时没有明显变化；当培养5d时，25mM糖浓度培养的原代胰岛和TCl—6细胞Glc基因表达明显升高，比低糖培养分别增高272％和78％； (3)10-7M胰岛素可以抑制低糖培养的原代胰岛和TCl—6细胞Glc的分泌，分别为60％((2315.02±48.12)pg/mg protein vs(915.99±32.54)pg/mg protein；P<0.05)和61％[(55.12±3.86)ng/106 protein vs(21.59±1.30)ng/106 protein，P<0.05]，但仅能轻微抑制高糖培养下原代胰岛和TCl—6细胞Glc的分泌；当胰岛素增至10-5M时，高糖培养下原代胰岛和TCl—6细胞的Glc的分泌也明显受到抑制，分别为66％[(3872.34±29.66)pg/mg protein vs(1307.65±23.34)pg/mg protein；P<0.05]和61％[(118.61±10.68)ng/106 protein vs(46.55±3.72)ng/106 protein； (4)加入10-5M胰岛素2h后，高糖和低糖培养下原代胰岛和TCl—6细胞P—Akt水平分别升高137％和70％以及200％和180％，但高糖组明显低于低糖组，给予PI3K抑制剂—wortmannin，低糖培养的原代胰岛和TCl—6细胞P—Akt水平抑制率明显高于高糖组。 结论：高糖可以引发原代胰岛和TCl—6细胞胰高糖素的分泌升高，其可能的机制与原代胰岛和TCl—6细胞胰岛素介导的PI3K/Akt信号通路受阻而产生的原代胰岛和TCl—6细胞保留有关。 第二部分： 目的：探讨逆转高糖毒性对α细胞胰高糖素分泌和合成的影响以及可能的机制。 方法：TCl—6细胞(α细胞株)分别给予5.5mmol/L(低糖组)和25mmol/L(高糖组)葡萄糖的培养基培养10d，25mmol/L葡萄糖培养5d/5.5mmol/L葡萄糖培养5d(高糖—低糖组)以及5.5mmol/L葡萄糖培养5d/25mmol/L葡萄糖培养5d(低糖—高糖组)，检测各组细胞胰高糖素分泌及其mRNA的表达；Western印迹检测持续高糖以及由高糖降至低糖后TCl—6细胞Snare蛋白(syntaxin1A和SNAP—25)的表达水平； 结果：(1)与高糖组TCl—6细胞相比，高糖—低糖组TCl—6细胞Glc分泌下降29％[(2.68±0.21)ng/mg protein vs(3.74±2.99)ng/mg protein，P<0.05]；(2)与高糖组TCl—6细胞相比，高糖—低糖组TCl—6细胞GlcmRNA表达下降52.6％±2.8％(P<0.05)；(3)高糖组TCl—6细胞表达syntaxin1A和SNAP—25的水平较低糖组TCl—6细胞syntaxin1A和SNAP—25的表达分别升高36％和69％(P<0.05)，而高糖—低糖组syntaxin1A和SNAP—25蛋白表达与高糖组相比明显下调，分别下降49％和56％(P<0.05)。 结论：解除高糖毒性α细胞胰高糖素分泌异常明显改善，促进胰高糖素分泌相关的syntaxin1A和SNAP—25蛋白表达相应降低。