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摘要P—gp/MDR1和ABCG2/BCRP是ABC膜转运蛋白家族成员，表达于足月胎盘合体滋养层的母体面胞膜，可以通过主动转运的方式，特异性地清除一些内源性的毒物或异生物，从而影响抗病毒药物等底物在胎盘滋养细胞的转运。因此，通过调控P—gp/MDR1和ABCG2/BCRP的表达，可提高抗病毒药物进入滋养细胞和胎儿血循环的浓度，更有效地阻断乙型肝炎的宫内感染。 目的：研究妊娠合并乙型肝炎胎盘P—gp/MDR1和ABCG2/BCRP的表达，及其与乙肝感染的相关性。 方法： 1.采用免疫组化技术，检测胎盘组织中P—gp/MDR1和ABCG2/BCRP的表达和定位。 2.采用荧光定量PCR技术检测人胎盘组织中P—gp/MDR1mRNA和ABCG2/BCRPmRNA的表达。比较乙肝感染胎盘与正常孕妇胎盘中P—gp/MDR1mRNA和ABCG2/BCRPmRNA的表达的差异。 3.采用Westernblot技术检测人胎盘组织中P—gp/MDR1和ABCG2/BCRP蛋白质水平的表达。比较乙肝感染胎盘与正常孕妇胎盘中P—gp/MDR1和ABCG2/BCRP蛋白表达的差异。 4.用ELISA检测胎盘组织中IL-1β、IL—6和TNF-α的含量。分析人胎盘组织中P—gp/MDR1和ABCG2/BCRP的表达与IL-1β、IL—6和TNF-α的相关性。 5.体外培养人胎盘滋养细胞BeWo和JEG—3，分别加IL-1β、IL—6干预后，用荧光定量PCR检测细胞P—gp/MDR1和ABCG2/BCRP表达的变化。进一步探讨人胎盘滋养细胞P—gp/MDR1、ABCG2/BCRP的表达与IL-1β和IL—6的相关性。 6.体外培养人胎盘滋养细胞BeWo，分别加IL-1β、IL—6干预后，用HPLC检测3TC在滋养细胞的滤过率的变化。 结果： 1.免疫组化结果显示，乙肝感染胎盘与正常孕妇胎盘中滋养细胞母体面胞膜均有P—gp/MDR1和ABCG2/BCRP表达。P—gp/MDR1和ABCG2/BCRP在足月妊娠胎盘组织中主要表达于胎盘合体滋养细胞母体面胞膜。与以往报道相似，部分合体滋养层细胞高表达，也有部分合体滋养层细胞不表达。 2.荧光定量PCR显示，乙肝感染胎盘P—gp/MDR1mRNA和ABCG2/BCRPmRNA的表达均高于正常组，差别有显著性。 3.Westernblot显示，乙肝感染胎盘P—gp/MDR1和ABCG2/BCRP蛋白的表达均高于正常组，差别有显著性。HBV感染胎盘组织P—gp/MDR1和ABCG2/BCRP蛋白质水平表达分别是正常足月胎盘表达量的2.43和3.76倍。与相对应的RealTimePCR结果的相关系数为0.980、0.963。 4.ELISA检测胎盘组织中IL-1β、IL—6和TNF-α的含量，乙肝组均高于正常组，乙肝组胎盘IL-1β、IL—6和TNF-α表达量分别是正常组的4.36、1.91、5.12倍。IL-1β、IL—6和TNF-β与P—gp/MDR1和ABCG2/BCRP的表达均有相关性。 5.体外培养人胎盘滋养细胞BeWo和JEG3，分别加IL-1β、IL—6干预12、24、48、72小时后，用荧光定量PCR检测细胞P—gp/MDR1mRNA和ABCG2/BCRPmRNA表达均升高，差别有显著性。P—gp/MDR1mRNA和ABCG2/BCRPmRNA表达随着IL-1β和IL—6作用时间的延长逐渐升高。 6.体外培养人胎盘滋养细胞BeWo，分别加IL-1β、IL—6干预48、72小时后，3TC在细胞的滤过率显著降低。 结论： 1.乙肝感染胎盘与正常孕妇胎盘中滋养细胞膜均有P—gp/MDR1和ABCG2/BCRP表达。 2.乙肝感染胎盘P—gp/MDR1mRNA和ABCG2/BCRPmRNA的表达均高于正常组。 3.乙肝感染胎盘P—gp/MDR1和ABCG2/BCRP蛋白的表达均高于正常组。P—gp/MDR1和ABCG2/BCRP蛋白表达升高可能与P—gp/MDR1mRNA和ABCG2/BCRPmRNA转录增强有关。 4.胎盘组织中IL-1β、IL—6和TNF-α的含量，乙肝组均高于正常组，IL-1β、IL—6和TNF-α与P—gp/MDR1、ABCG2/BCRP的表达均有相关性。提示IL-1β、IL—6和TNF-α可能诱导P—gp/MDR1mRNA和ABCG2/BCRPmRNA转录增强以及P—gp/MDR1和ABCG2/BCRP蛋白表达。 5.体外培养人胎盘滋养细胞BeWo和JEG3，分别加IL-1β、IL—6干预12、24、48、72小时后，P—gp/MDR1mRNA和ABCG2/BCRPmRNA表达均升高。P—gp/MDR1mRNA和ABCG2/BCRPmRNA表达随着IL-1β和IL—6作用时间的延长逐渐升高。提示IL-1β和IL—6可能在转录水平上调P—gp/MDR1mRNA和ABCG2/BCRPmRNA的表达。 6.体外培养人胎盘滋养细胞BeWo，分别加IL-1β、IL—6干预后，3TC在细胞的滤过率显著降低。可能与IL-1β、IL—6诱导的P—gp/MDR1和ABCG2/BCRP表达上调有关。