韭菜精细胞、卵细胞及原胚细胞的分离-论文-万方医学网

韭菜精细胞、卵细胞及原胚细胞的分离

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摘要被子植物的精卵细胞都位于体内，其中精细胞包裹在花粉粒中，卵细胞又深埋在胚珠中，且整个受精过程到早期的胚胎发生也都在体内完成，其中包括精卵细胞的识别、合子的不对称分裂及胚胎发生模式等。精细胞和卵细胞的成功分离，为受精机理的研究提供了基本前提。本研究成功分离得到了具有生活力的精、卵细胞、合子及早期原胚细胞，为进一步的研究韭菜雌雄配子体的分子生物学特性及受精机理等提供了条件。主要内容如下： ⑴韭菜生殖细胞、精细胞的分离：韭菜的花粉属于二胞型，即成熟的花粉粒中只含有一个生殖细胞，只有在花粉管中才会发生有丝分裂形成两个精细胞。本实验首先采用直接爆破花粉粒的方法分离得到具生活力的生殖细胞，并收集得到了生殖细胞的群体；尝试完全离体萌发花粉管及活体-离体法，成功分离得到了具生活力的精细胞，并收集得到了群体。为迸一步的研究韭菜的精细胞发生及其他分子生物学特性提供了实验基础。 ⑵韭菜卵细胞、合子及早期原胚细胞的分离：根据韭菜的开花及受精规律，成功的分离得到了卵细胞，并且还观察了从开花当天到开花第三天整个卵器细胞的发育规律，发现整个过程中，两个助细胞的体积都逐渐变大，但细胞的极性并没有发生明显的变化；卵细胞也逐渐变大，细胞核较大位于细胞的一边，另一边有一个大的液泡，且细胞中存在着明显的细胞质索，经FDA染色后荧光也多集中在细胞核部位；受精后，卵细胞变化成为合子，体积明显变小，细胞质明显变浓厚，细胞核不再明显，大液泡消失，经FDA染色后，荧光弥散于整个细胞表面；最后还成功收集得到了卵细胞及合子的细胞群体，为迸一步进行分子生物学比对提供了实验基础。在成功得到合子的基础上，还分离得到了二胞原胚、四胞原胚及多细胞原胚，为研究韭菜的早期胚胎发生提供了实验依据。