摘要目的:研究CarO蛋白的表达与临床鲍曼不动杆菌耐环丙沙星及亚胺培南的相关性,了解CarO蛋白的结构与鲍曼不动杆菌耐药的相关性。 方法:①收集长沙地区四家医院的56株鲍曼不动杆菌进行环丙沙星及亚胺培南药敏实验;②对临床敏感株进行环丙沙星体外诱导耐药实验;③PCR扩增Car0基因并测序;④实时荧光定量PCR测定各组CarO蛋白mRNA表达情况;⑤提取外膜蛋白并用SDS-PAGE分析CarO蛋白的表达水平;⑥利用生物信息学分析技术比对敏感菌株和耐药菌株CarO蛋白的结构与功能。 结果:⑴所收集的临床鲍曼不动杆菌对环丙沙星的耐率为85.7%,对亚胺培南的耐药率为12.5%;⑵无论是临床耐药菌株与临床敏感菌株比较,还是临床敏感菌株被诱导成耐环丙沙星菌株以后,CarO mRNA的表达和蛋白的表达都有下降;⑶信息学分析发现耐药菌株与敏感菌株相比,氨基酸突变多发生在胞外区域;⑷信息学分析比对发现,耐药菌株CarO蛋白氨基酸序列在177位比敏感菌株多一个蛋白激酶C磷酸化位点,该处位点与细菌耐药的关系有待证明;⑸耐药菌株CarO蛋白的内在氢键网络可能与敏感株有差别。 结论:①收集的临床鲍曼不动杆菌对环丙沙星的耐药情况较亚胺培南严重;②CarO蛋白的表达下调可能与临床鲍曼不动杆菌的耐药性相关;③CarO蛋白与鲍曼不动杆菌耐环丙沙星有一定相关性,佐证了CarO蛋白可能与细菌多重耐药有关;④CarO蛋白可能与细胞信号传导有关;⑤敏感菌株与耐药菌株的CarO蛋白功能位点和内部结构有差异,可能与细菌耐药有关。
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