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摘要到目前为止，已有上百个微生物β-葡萄糖苷酶基因得到克隆，许多微生物来源的β-葡萄糖苷酶基因已获得异源表达。真菌中目前研究得较多的是酵母和木霉属(Trichoderma)、曲霉属(Aspergillus')等霉菌。嗜热真菌研究较少，目前仅在Humicola grisea，Talaromyces emersonii和Thermoascus aurantiacus(原种)中报道过。由于嗜热真菌表达的热稳定性β-葡萄糖苷酶在高温环境中的稳定性和高活力，因此具有比常温菌β-葡萄糖苷酶无法比拟的应用优势。 嗜热子囊菌光孢变种(Thermoascus aurantiacus var.levisporus)是一种分布广泛、生长上限温度很高的真菌，该菌在乳糖为唯一碳源的培养基中50℃条件下可以产生β-葡萄糖苷酶，应用分子生物学手段，将热稳定β-葡萄糖苷酶基因导入毕赤酵母中高效表达，使β-葡萄糖苷酶在常温和短时间内快速、超量表达，以达到降低能耗和提高经济效益的目的，从而为工业应用奠定基础。 从嗜热子囊菌光孢变种(Thermoascus aurantiacus var.levisporus)RNA中通过RT-PCR克隆出β-葡萄糖苷酶基因bgl I和bgl II的全长序列。Genbank登录号分别为EU269025和EU263993，将各片段分别插入巴斯德毕赤酵母Pichia pastoris分泌型表达载体pPIC9K中，获得重组质粒pPIC9K/bgl I和pPIC9K/bgl II，经线性化后用电穿孔法导入毕赤酵母GS115中，在醇氧化酶AOX1基因启动子作用下，分别获得高效表达β-葡萄糖苷酶的毕赤酵母工程菌株。经DEAE-Sepharose阴离子层析分别纯化了重组表达蛋白，SDS-PAGE分别测得该重组蛋白分子量约为120 kDa和118 kDa。经甲醇诱导，工程菌株发酵液中β-葡萄糖苷酶的活力分别为1.2 U/mg和0.23 U/mg，小规模发酵量都达0.45 mg/mL。前者β-葡萄糖苷酶的最适反应温度为60℃，最适反应pH为5.5。70℃保温30分钟仍保持80％的酶活力，具有较高的热稳定性，在pH3.0～9.0的条件下酸碱耐受性强。后者β-葡萄糖苷酶酶的最适反应pH为5.0，最适反应温度为50℃，热稳定性比前者差。