摘要目的:本实验旨在通过建立鸭乙型肝炎动物模型,观察加减甘露消毒丹在体内对鸭乙型肝炎病毒有无抑制作用,并与核苷类药物拉米夫定的抗病毒作用相比较,初步探讨其机理。 方法:(1)造模:用PCR法筛选出D-HBV阳性麻鸭,抽取D-HBV阳性血清,经腿静脉接种三日龄麻鸭,建立麻鸭后天感染乙型肝炎病毒动物模型。(2)实验观察:将D-HBV阳性麻鸭40只随机分为5组,模型对照组(A组)、加减甘露消毒丹高剂量组(B组)、加减甘露消毒丹中剂量组(C组)、加减甘露消毒丹低剂量组(D组)和拉米夫定组(E组);各组给予常规饲料、自由饮水。观察组分别给予不同剂量加减甘露消毒(B组:30g·Kg·-1d-1;C组:20g·Kg·-1d-1;D组:10g·Kg·-1d-1)和拉米夫定(50mg·Kg·-1d-1)干预。治疗前、治疗中第7、第14、第21天及停药后第7天分别抽取静脉血0.2ml,每分钟3000转离心提取血清,-20℃冰箱保存备检。用药前剖杀D-HBV阳性雏鸭2只,灌药第21天剖杀加减甘露消毒丹高剂量组和拉米夫定组鸭子各2只,取肝脏组织放入4%甲醛内固定,常规HE染色观察炎症情况。(3)实验室检测:用实时荧光定量PCR(SYBR GreenⅠ)动态检测用药前、药物干预第7天、14天、21天、停药后7天血清D-HBV浓度及血清酶丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)变化;在光学显微镜下(×400倍)观察治疗前后各组肝脏病理改变情况。 结果:拉米夫定组用药后血清病毒水平迅速降低,治疗中一直维持较低水平。加减甘露消毒丹高、中剂量组血清病毒载量下降分别在第14、21天开始显效(与模型对照组组间比较P<(0.05),低剂量组治疗期间未见抑制病毒的作用。停药后加减甘露消毒丹高、中剂量组与模型对照组比较仍表现一定的病毒抑制作用;而拉米夫定组血清病毒滴度有所回升。ALT、AST治疗前后比较,拉米夫定组用药后ALT、AST迅速降低,治疗中一直维持正常水平。加减甘露消毒丹高、中剂量组ALT、AST分别在第14、21天开始显效(与模型对照组组间比较P<(0.05),低剂量组治疗期间未见明显作用。停药后加减甘露消毒丹高、中剂量组ALT、AST则持续复常状态。而拉米夫定组ALT、AST再度升高。肝组织病理切片显示治疗后加减甘露消毒丹高剂量组与拉米夫定组炎症改善情况相当。 结论:加减甘露消毒丹对D-HBV引起的肝炎有治疗作用,它不仅能够体内抑制病毒的复制,而且可以减轻免疫反应使ALT、AST复常及减轻肝脏的炎症。
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