摘要目的:优选积雪草总皂苷精制纯化的最佳工艺条件,为正在研制的抗抑郁新药“雪抑乐”提供符合纯度要求的原料。 方法:以积雪草总皂苷含量作为精制工艺评价指标,采用香草醛—高氯酸比色法测定积雪草总皂苷含量。超声波法提取积雪草总皂苷:精密称取积雪草药材适量,粉碎成粗粉(约10目),料液比1:12,加入12倍量60%乙醇浸泡20h,超声提取1h,提取一次,过滤,得积雪草总皂苷提取液。选取大孔吸附树脂精制积雪草总皂苷:以积雪草总皂苷吸附率及解吸率为评价指标,运用静态吸附及解吸附实验对大孔吸附树脂HPD100、DM130、AB—8及D101型4种型号大孔吸附树脂进行筛选,选取积雪草总皂苷的最佳吸附剂;通过单因素实验,以积雪草提取液通过预处理的树脂柱后皂苷的吸附量为指标,考察大孔吸附树脂富集、纯化皂苷的吸附性能和洗脱参数,包括吸附工艺中上柱液PH、径高比、流速、上样液浓度及上样量等因素对积雪草总皂苷吸附量的影响。采用不同浓度及用量的乙醇进行梯度洗脱,选取最佳的洗脱工艺,并对树脂的再生进行考察。 结果:通过方法学考察,香草醛—高氯酸比色法准确度、精密度、稳定性以及灵敏度均较好,由于比色法不需特殊仪器设备、成本低、采用的试剂较HPLC法环保、价廉,因此本实验采用香草醛—高氯酸比色法作为工艺研究中积雪草总皂苷含量测定方法。在静态吸附实验中,选用静态吸附率及解吸附率比较好的非极性D101型大孔吸附树脂精制皂苷,树脂有较好的吸附分离性能,适合于积雪草总皂苷的纯化。积雪草提取液通过处理过的D101型大孔吸附树脂,测得树脂动态吸附量为26.98mg/g干树脂,径高比为1:10(树脂柱1.5cm×36cm),积雪草上样液PH值为7.0,上样液质量浓度为0.8g生药/mL,流速为4BV/h(4倍柱体积/小时),最大上样量为8mL;上样吸附后,先用SBV蒸馏水洗去水溶性杂质,再用体积分数为50%的乙醇洗脱皂苷,用量为4BV,沈脱率达97.3%,收集过柱后的积雪草总皂苷乙醇洗脱液,水浴浓缩,真空干燥至恒重,得积雪草总皂苷精制品,得率为2.28%(精制品中积雪草总苷g/积雪草药材g),将总皂苷精制品用无水乙醇溶解,采用香草醛一高氯酸比色法测得积雪草总皂苷纯度由上柱前4.3%上升到33.3%,精制度达776.7%。在吸附—洗脱稳定性实验中,树脂重复使用3次后总皂苷的回收率降低了20%以上,必须再生方可继续使用。 结论:香草醛—高氯酸比色法操作较为简便,准确度,精密度以及灵敏度较好,且检测成本低,适合积雪草总皂苷精制工艺研究中积雪草总皂苷的测定。在所确定的工艺条件下,采用D101型大孔吸附树脂精制积雪草总皂苷,可有效富集、纯化积雪草总皂苷,具有选择性高,分离速度快、成本低的特点。精制过的积雪草总苷可作为“雪抑乐”的原料。
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