摘要差异蛋白质组学是目前蛋白质组学研究的一种重要研究策略。它着重于筛选和鉴定不同种类或状态下各样本之间蛋白质组的区别与变化,具有很强的可实现性。它可以确定与疾病相关的目标靶分子,为临床诊断、病理研究、药物筛选、新药开发、新陈代谢研究等提供理论依据和基础。 Bin1b是抗菌肽的一种,抗菌肽是生物体内天然存在的一类具有杀灭细菌和真菌等多种病原微生物的小肽。有些抗菌肽还具有杀灭病毒和癌细胞的作用,此外有些抗菌肽还具有促进精子运动,免疫调节等多种作用。此外,从基因水平上得知Bin1b还能促进未成熟精子的运动。为了深入研究Bin1b调节细胞表达的机制,本文用蛋白质组学方法从蛋白质水平找出由Bin1b基因高表达引起蛋白质的变化。本文首次采用差异蛋白质组学方法研究野牛型RM-1细胞和Bin1b稳定转染细胞的蛋白质组的表达差异,得到了野生型RM-1细胞和Bin1b稳定转染细胞蛋白表达图谱,找出差异蛋白并分析差异蛋白所表达的功能,找出了由Bin1b基因高表达引起蛋白质水平的变化,为研究Bin1b基因奠定了基础。 本文采用了双相凝胶电泳(Two-dimensional gel electrophoresis,2-DE)和基质辅助激光解吸电离(matrix-assisted laster desorption/ionization,MALDI)方法研究了野生型RM-1细胞和Bin1b稳定转染细胞的蛋白质组的表达差异。首先应用双向凝胶电泳技术对蛋白质进行分离,每一例样本均分别进3次双相电泳进行重复性实验,用PDQuest分析软件对两组的全蛋白质组表达谱进行差异分析,总共发现15个差异蛋白点(3倍以上差异)。对差异蛋白进行了胶内酶解,酶解后的肽段用MALDI-TOF-TOF质谱分析,将质谱数据送入NCBI非冗余数据库,通过MASCOT搜索引擎检索。最后10个差异蛋白得到成功鉴定。研究中发现Bin1b可能通过影响微管,肌动蛋白,以及它们的相互作用改变细胞骨架结构,影响细胞的运动及细胞内物质运输,并可能通过蛋白质二硫键异构酶等蛋白影响细胞外蛋白的结构,同时profilin-1的高表达也会影响细胞内的信号转导过程。进一步验证了Bin1b与精子运动有一定的相关性,而微管和肌动蛋白的改变可能是它作用机制的一个重要环节。本文中的蛋白质双向凝胶实验所得到的蛋白表达变化为进一步深入研究Bin1b在促进细胞运动、影响信号转导方面提供了重要的提示。本研究实验结果更进一步证实了Bin1b可以促进细胞的运动并且有抗菌、抗病毒的作用,为研究Bin1b的机理和深入理解相关分子机制提供了重要的参考。
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