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摘要目的：通过建立新生大鼠脑皮层神经元缺氧复氧模型，探讨还原型辅酶I(reduced nicotinamide adenine dinucleotide，NADH)对缺氧复氧诱发神经元凋亡的保护作用。 方法：原代培养新生24h内的Wister大鼠脑皮层神经元，利用神经元特异性烯醇化酶(neuronal specific enolase，NSE稀释度1：400)抗体，用免疫细胞化学方法进行神经元细胞鉴定，取生长状态良好的细胞随机分成三组：正常对照组：继续在37℃，5％CO2培养箱内培养；缺氧复氧组：将样本移入容积为20cm×20cm×15cm密闭自制玻璃缺氧盒，缺氧盒两端各有一孔(出气孔和入气孔)，连续通入5％CO2+95％N2混合气，流速为0.30L/min，持续通气30 min，完全置换出容器内的原有空气，维持一定的湿度，缺氧状态通过厌氧指示剂试纸验证，封闭缺氧盒置于37℃恒温箱内培养6h，然后将样本放回37℃，5％CO2培养箱进行复氧，分别复氧：6h、12h、24h、48h和72h；NADH组：按照上述方法进行缺氧后在培养液中分别加入终浓度为400μg/ml的NADH，分别放回37℃，5％CO2培养箱，进行与上述相同的复氧过程。利用透射电镜观察缺氧复氧后凋亡细胞的超微结构。利用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNNEL法)分别检测正常对照组，缺氧复氧组和NADH组在复氧6h、12h、24h、48h和72h细胞凋亡情况，分别计算各组在不同时间点细胞凋亡率，检验各试验组间细胞凋亡率的差异。 结果：正常对照组各时间点细胞凋亡率之间的差别无统计学意义(P>0.05)。缺氧复氧组和NADH组的凋亡率明显高于正常对照组的凋亡率，差异有统计学意义(P<0.01)。缺氧6h后复氧6h即有明显的细胞凋亡发生，且随着复氧时间的延长，缺氧复氧组和NADH组的凋亡率呈逐渐增加的趋势。在逐渐增长的趋势中，缺氧复氧组细胞凋亡率在复氧12h增长幅度最大，NADH组细胞凋亡率在复氧24h增长幅度最大。缺氧复氧组凋亡率明显高于NADH组的凋亡率，差异有统计学意义(P<0.05)。通过计算细胞凋亡抑制率表明在复氧12h内给予NADH，对于由缺氧复氧诱发的神经元凋亡抑制率明显高于其余复氧时间点。 结论： 1、随着复氧时间的延长，缺氧复氧组和NADH组的细胞凋亡率呈逐渐增加的趋势，凋亡速率先增大后减小。 2、缺氧复氧组凋亡率明显高于NADH组的凋亡率，说明NADH能明显拮抗缺氧复氧引起的细胞凋亡，NADH对缺氧复氧诱发的体外培养神经元凋亡有明显的抑制作用。 3、在复氧12h内给予NADH对凋亡的抑制作用较明显。