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小鼠不同发育时期囊胚半麦管法玻璃化冷冻保存的研究

摘要目的:探讨采用半麦管作为冷冻载体玻璃化冷冻小鼠不同发育时期的囊胚,比较各组囊胚冷冻复苏后的存活率及囊胚孵出率,选出一个冷冻效果最佳的囊胚分期,为玻璃化冷冻技术应用于临床提供一个实验依据。观察人工辅助脱水在玻璃化冷冻中应用后,胚胎存活及继续发育的能力,验证人工皱缩的安全性及有效性。<br>   方法:应用半麦管玻璃化冷冻小鼠囊胚,囊胚按照发育阶段分为早期囊胚组、囊胚期囊胚组、扩张期囊胚组、孵出期囊胚组,以15%二甲基亚砜+15%乙二醇+Ficoll400(10mg/mL)+0.65mol/L蔗糖为玻璃化冷冻液,冷冻早期囊胚39个、囊胚期囊胚75个、扩张期囊胚106个、孵出期囊胚27个,以同期未做冷冻的90个囊胚为对照组,观察冷冻复苏后囊胚的存活及继续发育情况。<br>   结果:<br>   1.各期囊胚复苏后,存活率分别是48.7%、45.3%、39.6%、66.7%;孵出率分别是73.7%、67.6%、66.7%、66.7%。存活率、孵出率均低于对照组(P<0.05);孵出期囊胚冷冻复苏后存活率66.7%高于囊胚期囊胚和扩张期囊胚45.3%、39.6%(P<0.05)。<br>   2.冷冻前对扩张期囊胚进行人工皱缩,复苏后皱缩组囊胚复张率80%高于未皱缩组39.6%,差异有统计学意义(P<0.05);复苏后皱缩组囊胚孵出率75%高于未皱缩组66.7%,差异无统计学意义(P>0.05)。<br>   结论:<br>   1.玻璃化冷冻能够较好地保存晚期发育胚胎,方便、快速、省时,为临床应用提供了实验依据。<br>   2.各期囊胚的冷冻复苏后的存活率、孵出率与对照组相比均有统计学差异,玻璃化冷冻的安全性有待于进一步研究。<br>   3.孵出期囊胚也可以冷冻保存,且存活率较高,复苏后有利于囊胚种植。<br>   4.对扩张期囊胚冷冻前进行人工皱缩,可以提高扩张期囊胚冷冻复苏后的存活率和孵出率,但人工皱缩的安全性和有效性有待于大量的动物实验来近一步证实。

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