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摘要目的：<br>　　 本课题是在长期临床研究基础上开展的动物实验研究。研究目的:<br>　　 (1)菟丝子黄酮，六味地黄丸对生殖损伤保护作用；<br>　　 (2)雷公藤多苷所致的生殖损伤与后期生育能力的关系。<br>　　 方法：<br>　　 1.菟丝子黄酮，六味地黄丸对GTW所致雄性幼鼠生殖损伤的影响<br>　　 周龄SD雄性幼鼠48只，随机分为四组:空白组、雷公藤多苷组(多苷组)、六味地黄丸+雷公藤多苷组(六味组)、菟丝子黄酮+雷公藤多苷组(黄酮组)，每组12只。空白组每日灌服0.5％羧甲基纤维素钠0.5ml/100g，多苷组每日灌服GTW9mg/kg，六味组每日灌服六味地黄丸1g/kg和GTW9mg/kg，黄酮组每日灌服菟丝子黄酮0.1g/kg和GTW9mg/kg，以上剂量均依据生药用量计算。给药12周，于末次给药1h后取血留取血清检测血清睾酮浓度:取一侧睾丸、附睾称重，计算脏器指数，Bouin液固定观察睾丸附睾组织形态学改变。<br>　　 2.菟丝子黄酮，六味地黄丸干预GTW所致生殖损伤雄性大鼠生育能力的影响<br>　　 周龄SD雄性幼鼠100只，随机分为四组，每组25只，其分组方法、给药剂量、疗程同第一部分。于末次给药th后，将所有大鼠分笼喂养，按照1:1比例放入成年雌性大鼠1只进行合笼，每次合笼为两周，然后再分笼两周，再进行下一次合笼，共分三个周期。详细记录每组雄性大鼠所配对的雌性大鼠受孕率、产仔总数、产仔时间、产仔的数量，产仔体重，产仔离乳存活率(观察仔鼠三周因仔鼠三周后可以离乳存活)。<br>　　 3.菟丝子黄酮，六味地黄丸干预GTW所致生殖损伤雄性幼鼠睾丸组织EGF，p450scc的影响<br>　　 标本来自实验第一部分留取的睾丸组织。用原位杂交法检测睾丸表皮生长因子(EGF)基因表达；用RT-PCR法、Western blot法检测p450scc的基因和蛋白表达。<br>　　 结果：<br>　　 1菟丝子黄酮，六味地黄丸干预GTW所致雄性幼鼠生殖损伤的影响<br>　　 血清睾酮:多苷组、六味组、黄酮组，血清睾酮水平均较正常组下降(P<0.05)，说明雷公藤多苷可以明显降低血清睾酮值。其中多苷组最低，黄酮组次之，六味组低于空白组但高于其它两组，与多苷组相比，统计学分析具有显著性差异(P<0.05)，提示六味地黄丸可以提高大鼠血清睾酮水平。菟丝子组与多苷组相比血清睾酮水平虽有提高，但统计学分析无差异(P>0.05)。提示菟丝子黄酮对血清睾酮浓度改善不显著。<br>　　 大鼠体重、睾丸重量及睾丸重量指数:空白组大鼠体重最大，其余使用GTW各组体重均不同程度降低，但统计学分析没有差异(P>00.05)。六味组、黄酮组与多苷组相比体重均有所增加，统计学分析也无差异(P>0.05)，以上结果提示GTW对大鼠体重有减轻作用，补肾中药能提高大鼠体重。<br>　　 睾丸重量来看依次是黄酮组>空白组>六味组>多苷组，统计学分析黄酮组与多苷组相比有显著性差异(P<0.05)，其余各组之间均无显著性差异(P>0.05)。提示GTW对大鼠睾丸重量可有降低作用，菟丝子黄酮可以明显增加大鼠睾丸重量，六味组也具有增加睾丸重量的作用。<br>　　 大鼠附睾重量及附睾重量指数:空白组附睾重量及附睾指数均大于其他各组，其中附睾重量经统计学分析无显著性差异(P>0.05)，附睾指数经统计学分析无显著性差异(P>0.05)。菟丝子黄酮组，六味组的附睾重量均大于多苷组，六味组附睾重量，附睾指数均大于多苷组，但统计学分析均无差异(P>0.05)。提示雷公藤多苷对大鼠附睾的发育有影响，菟丝子黄酮与六味地黄丸在保护GTW对附睾的损伤可能具有一定作用。<br>　　 睾丸组织形态学改变:多苷组大鼠睾丸曲细精管腔内上皮变薄，细胞层次紊乱，精原细胞、精母细胞明显减少，精子细胞及精子减少更加明显，Sertoli细胞分布稀疏，某些生精细胞肿胀变性，偶见间质轻度水肿，Leydig细胞病理变化不太明显。六味组、黄酮组大鼠睾丸曲细精管上皮略变薄，细胞层次尚分明，精原细胞、精母细胞、精子细胞均有所减少，但减少程度均不如多苷组明显。间质细胞数目及发育未见明显异常。提示雷公藤多苷对雄性大鼠的睾丸组织形态学有一定的影响，补肾中药能干预这种影响，起到保护作用。<br>　　 2菟丝子黄酮，六味地黄丸对GTW所致生殖损伤雄性大鼠生育能力的影响第一次合笼情况2.1用药12周后，大鼠的体重情况无差异(P>0.05)，说明用药12周后，雷公藤多苷对大鼠的基本生长情况无影响。体重的变化反映了大鼠对雷公藤多甙毒性的整体反应，说明大鼠从幼年到成鼠期间对雷公藤多苷代偿能力较好。<br>　　 2.2各组所对应雌鼠在第一次合笼后受孕率分别为空白组为80％，多苷组为68％，六昧组为85％，黄酮组为85％。第一合笼各组受孕率，平均受孕天数，产仔数，幼仔平均体重雷公藤多苷组各值低于其它组，提示GTW可能具有一定的抗生育能力。<br>　　 2.3第二次合笼情况<br>　　 黄酮组在第二次合笼后全部生育结束，六味组已基本生育结束，剩一只未孕。多苷组在第二次合笼7只有五只生仔，仅剩两只未孕，在第一次合笼中生育有影响但经过停药期后，很快恢复生育功能。空白组剩5只，有四只未孕，受孕率与受孕天数明显比用药组延长。这也说明一点受孕生育与自然因素也密切相关。<br>　　 从第二合笼可以看出各组受孕率，平均受孕天数，产仔数，幼仔平均体重多苷组与其它组比较无显著性差异，提示雷公藤多苷对生育没有影响或影响较小。<br>　　 2.4第三次合笼情况<br>　　 空白组全部生育结束，多苷组有一只未孕，六味组一只未孕。虽然合笼结束，但本课题组后来仍然对剩余2只进行了观察，可喜的是剩余两只也全部生育。在本次实验中说明雷公藤多苷对生殖系统的损伤是可逆的，对后期的生育能力没有影响或影响很小。<br>　　 3菟丝子黄酮，六味地黄丸对GTW所致生殖损伤雄性大鼠睾丸组织EGF，p450scc表达的影响<br>　　 睾丸组织EGFmRNA表达光密度值测定:雷公藤多苷组可见EGFmRNA表达量明显低于补肾中药组及空白组，统计学分析有显著性差异(P<0.05):六味组、黄酮组EGFmRNA表达量高于雷公藤多苷组，统计学分析有显著性差异(P<0.01)。空白组与六味组，菟丝子组比较无显著性差异(P>0.05)。<br>　　 实验结果提示，雷公藤多苷对大鼠睾丸EGFmRNA表达一定的抑制作用，而菟丝子黄酮，六味地黄丸具有明显的改善这种抑制作用，提高EGFmRNA表达量。提示菟丝子黄酮，六味地黄丸对雷公藤多苷导致的生殖损伤具有保护作用。睾丸组织p450sccmRNA基因表达的灰度值测定:<br>　　 黄酮组，六味组，雷公藤组与空白组比较均有升高，黄酮组与其它三组比较有显著性差异(P<0.01)。六味组与其它三组比无明显的差异性(P>0.05)。多苷组与空白组比有升高，但统计学无差异性(P>0.05).提示菟丝子黄酮能明显提高p450sccmRNA的表达量。六味地黄丸提高p450sccmRNA的表达量的作用不显著，多苷组p450sccmRNA的表达量也升高，现机制不咀。<br>　　 睾丸组织p450sccmRNA蛋白表达的灰度值测定:<br>　　 甩药三组数值均低于空白组，多苷组p450scc蛋白的表达值最低与空白组比较有显著性差异(P<0.05)，六味组、黄酮组蛋白的表达值高于多苷组，但统计分析无显著性差异(P>0.05)。六味组与黄酮组比较无显著性差异(P>0.05)。提示雷公藤多苷在蛋白水平能降低P450scc表达。六味组，黄酮组蛋白表达高于多苷组，提示六味地黄丸和菟丝子黄酮能上调P450scc蛋白的表达而起到保护生殖损伤的作用。<br>　　 结论：<br>　　 1.雷公藤多苷所致实验雄鼠生育能力的损伤是可逆的，实验雄鼠停药后生育能力可以逐渐恢复。<br>　　 2.雷公藤多苷对实验雄鼠的幼仔没有影响，幼仔生长发育良好。<br>　　 3.菟丝子黄酮，六味地黄丸能提高实验雄鼠睾丸组织的EGFmRNA、P450scc蛋白表达，可能是菟丝子黄酮，六味地黄丸对雷公藤多苷所致实验雄鼠生殖损伤的保护机制之一。