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摘要目的:区分NZB/W F1狼疮鼠体质，观察益气破血解毒小复方对不同体质狼疮鼠肾炎、肾纤维化的干预作用，并探索其可能的作用机制。<br>　　 方法:第一部分划分NZB/W F1狼疮小鼠体质。使用“小鼠四诊工作站”测量小鼠体重、体温、爪尾色泽(r值)、小鼠活动度等，并据“权重总值=爪校正值×1+尾校正值×0.2+腋温校正值×0.7+心率校正值×0.05+跨格数×0.025”公式计算权重值，根据总权重值高，提示热体；总权重值低，提示寒体的原则，将158只雌性NZB/W F1狼疮鼠分为寒、热、常三种体质。并从不同体质小鼠的体重、肾组织羟脯氨酸含量、Smad2/3蛋白表达、CTGF基因、脾脏淋巴细胞IFN-γ基因表达水平、病理切片等方面进一步证实了NZB/W Fl狼疮鼠确实存在体质差异。<br>　　 第二部分益气破血解毒小复方对不同体质NZB/W F1狼疮小鼠肾炎肾纤维化干预作用的研究。将每种体质狼疮鼠随机分为空白对照组、中药组、西药组、中西药组，共计12组。5月龄起，分别给予空白对照组(包括寒、热、常三种体质)生理盐水0.5ml/d，中药组(包括寒、热、常三种体质)450mg/ml益气破血解毒小复方煎剂0.5ml/d，西药组(包括寒、热、常三种体质)1.3mg/ml骁悉水溶液0.5ml/d，中西药组(包括寒、热、常三种体质)900mg/ml益气破血解毒小复方煎剂0.25ml/d+2.6mg/ml骁悉水溶液0.25ml/d，持续干预8周，并分别于开始灌胃第0、2、4、6周收集小鼠24小时尿液作蛋白定量检测。干预结束后无菌条件下处死小鼠，取血，分离外周血单核细胞，培养48小时后，ELISA法检测上清液IFN-γ、IL-10。取脾脏置于无菌培养皿内，称重后，机械分离淋巴细胞，培养72小时后抽提RNA，采用Real time-PCR法，观测IFN-γ、IL-10 mRNA的表达。取右肾，分别行CTGF、TGF-β1 Real time-PCR、Smad2/3 Western blot和羟脯氨酸含量检测。取左肾切片后行HE、PAS染色及免疫荧光染色分析。<br>　　 结果:(1)158只NZB/W F1狼疮鼠通过上述方法区分体质得到常体小鼠77只、寒体小鼠41只，热体小鼠40只。<br>　　 (2)治疗前不同干预组小鼠24小时尿蛋白定量情况无统计学差异。干预两周、四周、六周后再次收集24h尿样检测蛋白含量，数据显示空白组小鼠三次的尿蛋白量皆显著高于各个治疗组(皆P<0.01)，各治疗组间未见统计学差异。空白组肾组织羟脯氨酸含量、TGF-β1基因表达、IL-10基因表达、CTGF基因表达显著高于各治疗组(p<0.05、p<0.05、p<0.05、p<0.01)，各治疗组间未见统计学差异。空白组脾淋巴细胞IFN-β基因表达量显著高于西药组(p<0.01)和中西药组(p<0.01)，与中药组间无统计学差异。不同干预组小鼠外周血单核细胞培养上清液中IFN-β及IL-10的含量未见显著差异。肾脏病理:H.E和PAS.染色显示出了不同干预组间疗效存在差异。空白组未经药物干预而呈现典型自发狼疮样肾脏病理改变，病变程度在4个组中最为严重；中药组、西药组、中西医结合组系膜细胞增生、系膜基质增宽等肾脏病变的情况较模型组减轻，其中以中西医结合组病变最轻。<br>　　 (3)同一干预组内不同体质小鼠的不同反应。<br>　　 空白组寒体质小鼠脾淋巴细胞IL-10基因表达量显著低于同组常体(p<0.01)和热体(p<0.01)，常体该基因表达高于热体，二者比较具有统计学差异(p<0.05)。<br>　　 中药组寒体质小鼠肾组织的CTGF和TGF-β1基因表达显著高于热体(p<0.01)和常体(p<0.01)。<br>　　 西药组热体质小鼠肾组织的CTGF基因表达显著高于寒体(p<0.01)和常体(p<0.01)，寒体质小鼠肾组织TGF-β1基因表达显著低于热体(p<0.01)和常体(p<0.01)，寒体质脾淋巴细胞IL-10基因表达量显著低于同组常体(p<0.01)。<br>　　 中西药组干预6周后热体质小鼠24h尿蛋白量显著高于寒体质小鼠(p<0.05)。热体质和寒体质小鼠外周血单核细胞培养上清液IL-10的含量显著高于常体质小鼠(p分别<0.01和<0.05)，寒体质小鼠肾组织的CTGF基因表达显著高于常体(p<0.05)，而TGF-β1基因表达则显著低于热体(p<0.01)和常体(p<0.01)，热体质小鼠脾淋巴细胞IL-10基因表达量显著高于寒体(p<0.05)和常体(p<0.05)。四个干预组热体质小鼠肾组织羟脯氨酸含量显著低于常体质小鼠(p<0.05)和寒体质小鼠(p<0.05)。<br>　　 (4)同一体质狼疮鼠对不同干预措施的反应。<br>　　 常体质小鼠中，空白组肾组织羟脯氨酸含量、CTGF基因表达和脾淋巴细胞IL-10基因表达显著高于中药组(p<0.05、p<0.01、p<0.05)、西药组(p<0.05、p<0_01、p<0.05)和中西药组(p<0.05、p<0.01、p<0.01)；西药组的外周血单核细胞培养上清液IL-10的含量显著高于中西药组(p<0.05)；中西药组的体重增加量显著高于空白组(p<0.05)，中西药组脾淋巴细胞IL-10基因表达量显著低于中药组(p<0.01)和西药组(p<0.01)；中西药组肾组织的TGF-β1基因表达显著高于中药组(p<0.01)。<br>　　 热体质小鼠中，空白组肾组织的CTGF基因表达显著高于中药组(p<0.05)和中西药组(p<0.05)，中药组和中西药组间未见显著性差异，西药组该基因表达量显著高于中药组(p<0.01)和中西药组(p<0.05)，中药组小鼠肾组织的TGF-β1基因表达显著低于中西药组(p<0.01)；中西结合组的肾组织羟脯氨酸含量显著低于同体质空白组(p<0.01)、中药组(p<0.05)和西药组(p<0.05)。<br>　　 寒体质小鼠中，空白组肾组织的CTGF、IFN-γ基因表达显著高于西药组(p均<0.05)和中西药组(p均<0.05)；中药组脾淋巴细胞IFN-γ、肾组织的TGF-β1基因表达显著高于西药组(p均<0.01)和中西药组(p均<0.05)。西药组外周血单核细胞培养上清液中IFN-γ的含量显著低于中西药组(p<0-05)。中西药组的肾组织羟脯氨酸含量显著低于空白组( p<0.05)。<br>　　 结论:(1)本课题证实NZB/W F1狼疮鼠确实存在寒体、热体和常体的体质差异。研究显示不同体质狼疮鼠不仅在病情轻重上存在差异，在免疫荧光染色也存在显著差异，相关基因和蛋白表达也不相同。而且不同体质狼疮鼠对于相同药物干预的反应也有所不同。这提示我们在今后小鼠(至少是狼疮鼠)实验中，除了考虑小鼠品系外，也应注意到同一品系间的个体差异(体质的不同)。在实验分组前应该先区分体质，然后再在相同体质组内随机分组，以排除因小鼠体质因素导致的实验偏差，提高实验结果的准确性和可靠性。<br>　　 (2)本课题证实益气破血解毒小复方在治疗狼疮性肾炎、肾纤维化方面疗效确切。经益气破血解毒小复方治疗的小鼠，不仅在精神状态、体重等一般情况上明显优于空白对照组，在病理、生化和分子生物学水平均体现出了显著差异。中药组在减少尿蛋白量，改善肾炎、防止肾纤维化等方面与西药组有着近似的疗效，而中西药组疗效最佳，说明本实验所用小复方和西药骁悉可能存在不同的作用机制，二者联合使用具有协同增效作用。<br>　　 (3)本课题从细胞信号转导水平揭示了益气破血解毒小复方可能的作用靶点和机制。其可能通过减少炎性介质如:IL-10、IFN-γ等的分泌，抑制TGF-β通路激活，抑制丝氨酸/苏氨酸激酶从而延缓和减轻肾脏局部炎性反应和纤维化。