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蜡蚧轮枝菌固态发酵产孢培养的研究

摘要蜡蚧轮枝菌(Verticilliu.lecanii)是一种重要的生物防治真菌,寄主范围广,能寄生蚧类、蚜虫类、螨类、粉虱,还可寄生鳞翅目的一些害虫、线虫等,在生物防治中有重要的应用价值。固态发酵具有设备投资少、能耗低、污染少、容易操作等特点,非常适用于蜡蚧轮枝菌的治病活体分生孢子的生产。本论文研究了蜡蚧轮枝菌的常规固态发酵及惰性载体吸附固态发酵产孢:优化了吸附的液体培养基和培养参数,比较了天然及合成惰性载体吸附固态发酵产孢性能的差异,并对PU软质泡沫吸附固态发酵产生的分生孢子进行了抗逆性测定,最终建立了一个可回收利用、便于操作的PU软质泡沫吸附固态发酵体系,取得了较好的结果。<br>   1.对蜡蚧轮枝菌菌株(Verticilliu.lecani.CB.102071)的原始菌种进行了活化培养,研究了PDA平板菌落、菌丝及孢子形态,最后确定成功的获得了原始菌株的纯培养,并按照真菌的保藏方法进行了保藏;以麦麸为天然固态发酵基质进行了常规的固态发酵,优化了发酵参数,确定了优化条件下的蜡蚧轮枝菌菌株(Verticilliu.lecani.CB.102071)的产孢量及周期:最适温度在23~25℃,最适料水比为5:4,接种浓度为8×107孢子/ml;优化后麦麸产孢量约为2.40×109孢子/g干重,培养6~8d达到最大产孢量。<br>   2.以废弃的甘蔗渣作为惰性载体,进行惰性载体吸附固态发酵。先对吸附的液体培养基进行了统计优化,获得了优化的培养基配方(g/l):玉米粉35.79,酵母膏8.69,KH2PO.1.63,K2HPO.0.5,MgSO20.25。然后将常规的麦麸固态发酵和甘蔗渣吸附固态发酵的产孢量进行比较:优化培养基后,甘蔗渣吸附固态发酵产孢量达到1.08×1010孢子/g干重,比麦麸常规固态发酵产孢量(2.40×109孢子/g干重)提高约350%。<br>   3.选择5种惰性载体(甘蔗渣、玉米芯、稻草、PU软质泡沫、活性炭),研究吸附经过优化的液体培养液固态发酵产孢性能的差异。比较了产孢量、生长曲线、分生孢子萌发率:甘蔗渣、PU泡沫吸附固态发酵的产孢量最高;甘蔗渣、PU泡沫吸附固态发酵的稳定期较长,不易衰亡:5种不同的惰性载体固态发酵产生的分生孢子24h的萌发率都为100%。通过比较分析,最终选择了可以回收重复利用的PU软质泡沫作为后续固态发酵产孢的惰性载体。<br>   4.对PU软质泡沫吸附固态发酵参数进行了研究,确定了适宜的产孢子条件及最优条件下的产孢量和周期:培养温度25℃、吸附培养液14ml、培养基初始pH=5.5、接种量16×107孢子、菌种代数第二代、菌龄为6d;在优化条件下,最高产孢量约为2.05×1010孢子/g干重,培养10~13d获得最高的产孢量。<br>   5.分生孢子的抗逆性研究。对PU软质泡沫吸附固态发酵体系生产的分生孢子的耐高温、低湿度、紫外线辐射进行了研究:温度从30~40℃时,分生孢子的萌发率从97~10%;在相对湿90~65%下,分生孢子的萌发率逐渐在下降,萌发率从98%~0;在用紫外线辐射从30~300s时,分生孢子的萌发率不断在减小,从96%降到24%。这些参数与文献报道的其它蜡蚧轮枝菌分生孢子相比,PU软质泡沫吸附固态发酵体系生产的Verticilliu.lecani.CB.102071分生孢子有较好的抗逆性。

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