检索历史 清除

摘要乙肝病毒(HBV)在世界范围内广泛流行，严重威胁人类的健康。研究发现，在HBV的控制和清除过程中特异性CTL发挥着重要功能。因此，CTL表位具有非常广阔的应用前景。目前，已经鉴定的HBV CTL表位主要由国外研究人员完成。由于HBV分为8个基因型，它们的分布具有地理特异性，这些国外鉴定的表位序列在我国流行的HBV中可能会发生突变。为了了解这些表位在我国流行毒株中的变异情况，本研究首先调查了HBcAg18-27和HBsAg183-191两个优势表位的突变情况。结果显示，样品中HBcAg18-27表位序列有93.3％(98/105)发生了突变，由FLPSDFFPSV(V27表位)序列突变成了FLPSDFFPSI(I27突变肽)；HBsAg183-191表位序列有16.5％发生了突变，由FLLTRILTI(R187表位)突变成了FLLTKILTI(K187突变肽)。对突变表位的功能研究表明，I27和K187突变表位在体外均能与HLA-A2分子形成MHC-I/肽复合物，与HLA-A2分子具有很高亲和力，在HLA-A2/Kb转基因小鼠体内能诱导CTL产生，在病人体内能被加工和提呈。这些结果表明它们仍然是HLA-A2限制性表位。突变表位与原始表位的交叉实验显示，I27特异性CTL能与V27表位交叉反应，但是反过来V27特异性CTL不能交叉识别I27突变表位；K187和R187之间均具有部分交叉反应。这些研究结果对于将来在我国设计HBcAg18-27和HBsAg183-191表位疫苗具有的参考价值。<br>　　 为了设计HBV CTL多表位疫苗，本研究选择了五个HBV CTL表位，分别为三个HLA-A2限制性表位(HBcAg18-27、HBsAg183-191和HBsAg335-343)，一个HLA-A11表位(HBcAg88-96)和一个HLA-A24表位(HBcAg117-125)。将这五个表位设计成HBV多表位疫苗pc-HT，以泛素作为佐剂构建成HBV CTL多表位疫苗pc-HTU。两种多表位疫苗免疫HLA_A2/Kb转基因小鼠后，通过ELISPOT实验和杀伤实验进行检测。结果显示，pc-HT和pc-HTU均能在转基因小鼠体内诱导产生特异性CTL，泛素能增强HBV CTL多表位疫苗的细胞免疫效果。