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摘要本文简述了以下主要内容：<br>　　 1.pH对Ssh10b蛋白稳定性的影响<br>　　 Ssh10b蛋白是一个极端嗜热蛋白，晶体结构显示，蛋白中含有多对离子对和一个离子对网络。文献报道，通过比较嗜热蛋白和嗜温蛋白的13个结构参数，唯一具有统计显著性差异的参数是离子对的数目。因此，认为嗜热蛋白中的静电相互作用可能对蛋白质的热稳定性具有重要意义。<br>　　 氨基酸定点突变技术是研究离子对与蛋白热稳定关系的常用手段，但所得到的结果缺乏一致性，因为突变在破坏离子对的同时也改变了其它相互作用。因此，笔者用改变溶液pH值的方法破坏离子对，来研究Ssh10b蛋白中离子对的作用。<br>　　 在没有变性剂的条件下，溶液的pH值在1-12的变化，对Ssh10b蛋白构象基本没有影响。在GdnHCl平衡变性中，△G(H2O)，相对于静电作用被破坏的很高或很低pH情况，最大变化只有15KJ.mol-1。而蛋白的酸碱滴定实验的结果进一步说明，离子对通过静电作用贡献的稳定能实际上还要小于这一数值。<br>　　 理论上，由于在高温下折叠态蛋白中极性残基所需的溶剂化能的减少，因此被认为离子对在高温下将起到稳定作用。但在热变性实验中，Tm值，只表现出轻微的增长，从340K上升到350K。这说明即使在高温下，Ssh10b中带电残基和离子对对折叠态的稳定能影响较小。<br>　　 最近的几个研究表明，电荷-电荷间的相互作用会影响变性态的致密程度，从而对蛋白的稳定产生一定的作用。因此，前面的结果意味着Ssh10b蛋白可能具有比较致密的变性态，这与以前所报道的Ssh10b蛋白具有相对较小的△Cp是吻合的。<br>　　 总之，Ssh10b蛋白相对于嗜温蛋白较多的带电残基和离子对，对于折叠态蛋白稳定性的贡献是很小。较多的带电残基和离子对可能是通过改变变性态状态而最终提高蛋白的变性温度。<br>　　 2.Ssh10b蛋白动力学折叠机制的研究<br>　　 Ssh10b蛋白是一个由两个相同亚基组成的双体蛋白，其动力学折叠机制研究还是一片空白。<br>　　 通过分析超离心实验得到，Ssh10b蛋白在6MGdnHCl下为单体，在2.5MGdnHCl下为双体。在Ssh10b蛋白复性过程中，存在两个阶段：FastPhase和SlowPhase。研究发现，FastPhase的大小与蛋白浓度成正比，SlowPhase的复性速率没有蛋白浓度的依赖性。没有蛋白浓度依赖性，这说明SlowPhase是个单分子过程，黏度实验也证实了SlowPhase是个单分子过程。我们猜测单体结合成双体的过程发生在FastPhase。Ssh10b蛋白在变性态仍有相当的二级结构存在且结构相对紧密，因此在最初的复性过程中，蛋白单体(u)有可能迅速地相互识别，形成双体(U2)，之后再形成中间体(I2)。<br>　　 所以本文初步提出Ssh10b蛋白复性可能的动力学折叠机制：<br>　　 3.鸡肌腺苷酸激酶(CMAK)突变体AKP96G、AKP17，96G的构建<br>　　 蛋白质构象多型性的分子基础不是唯一的，在多数情况下，脯氨酸异构化是导致蛋白质构象多型性的主要因素。验证蛋白的多型性是否由脯氨酸异构化引起，一个有效的方法是将相关的脯氨酸残基用无构象选择性的甘氨酸替代，如果多型性消失，说明脯氨酸异构化确有可能使得蛋白质在天然态以多种构象共存。在本室先前的工作中，野生型鸡肌腺苷酸激酶及其突变体AKP17G、AKP17V已经构建完毕，并证实了Pro17在鸡肌肌腺苷酸激酶形成多种构象中作用显著。为了进一步研究Pro在鸡肌腺苷酸激酶的多型性中起到的作用，笔者构建了突变体AKP96G、AKP17，96G。